MÉTODO PARA INCREMENTAR EL CONTENIDO DE TREHALOSA DE LOS ORGANISMOS POR MEDIO DE SU TRANSFORMACIÓN CON EL ADNC DE LA TREHALOSA-6-FOSFATO SINTASA/FOSFATASA.

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1 MÉTODO PARA INCREMENTAR EL CONTENIDO DE TREHALOSA DE LOS ORGANISMOS POR MEDIO DE SU TRANSFORMACIÓN CON EL ADNC DE LA TREHALOSA-6-FOSFATO SINTASA/FOSFATASA DE SELAGINELA LEPIDOPHYLLA PATENTE MEXICANA 205414 NO. SOLICITUD MX 9601719

2 Descripción: Problema: Ditintos organismos, particularmente plantas, no presentan una osmorregulación que permita resistencia a sequía, salinidad, frío y a otros tipos de estres ambiental. Para promover la osmoregulación se requiere que los organismos sintetizen o incorporen osmoreguladores. Son escasos los métodos y productos conocidos con los cuales se puedan obtener metabolitos osmoreguladores. Por lo tanto, en distintos campos tecnológicos se requiere de métodos, productos y organismos que sean capaces de productir osmoreguladores. De igual forma se requieren organismos capaces de resistir el estres ambiental.

3 Descripción: Antecedentes: Se conocían distintos osmoreguladores, tales como el polisacárido trehalosa. Se sabía que la trehalosa permite la crioprotección, la resistencia a la salinidad, mantiene el metabolismo celular y la actividad enzimática áún en condiciones medioambientales adversas. Distintos organismos son capaces de sintetizar trehalosa (ciertos tipos de bacterias, hongos, esporas, nemátodos, larvas de crustáceos, insectos y algunas plantas). Se sabía que la planta Selaginella lepidophylla es capaz de sintetizar trehalosa en grandes cantidades (80% de los azúcares totales) y tener resistencia a estrés ambiental (resiste nitrógeno líquido y descongelación, soporta calor -hasta 100 o C-, y radiación ionizante).

4 Descripción: Antecedentes: Se sabía que la síntesis de la trehalosa depende de genes que codifican para la trehalosa-6-fosfato sintasa/fosfatasa. Se habían desarrollado plantas transgénicas resistentes a sequía conteniendo los genes de otsA y otsB de E. coli o el gene TPS1 de levadura (dichos genes codifican para la trehalosa-6-fosfato sintasa/fosfatasa). Se sabía de la existencia del gene de la trehalosa-6-fosfato sintasa/fosfatasa en Arabidopsis.

5 Descripción: Solución: Identificar y aislar los genes encargados de la síntesis de la trehalosa de la planta S. lepidophyla, desarrollar organismos genéticamente modificados (microorganismos, plantas, etc) que expresen dichos genes, y obtener a partir de ellos (a nivel industrial ) la trehalosa purificada.

6 Descripción: Ejemplos de Trabajo: a) Descripción de los lugares en donde se obtuvieron las plantas S. lepidophyla (suelos rocosos de zonas áridas de los Estados Mexicanos de Morelos y Oaxaca) b) Aislamiento del gene (sl-tps/p), encargado de la síntesis de la trehalosa de la planta S. lepidophyla, mediante “gene fishing”. b) Demostración de que el gene sl-tps/p se expresa constitutivamente. c) Obtención de Organismos Transgénicos (bacterias, y Plantas de Tabaco) que contienen al gene sl-tps/p y expresan trehalosa.

7 Materia Reclamada en la Solicitud Reivindicaciones originalmente presentadas: 1.- Un fragmento de ADN aislado y purificado caracterizado poque consiste de la secuencia SEQ ID NO:1 o una mutación funcionalmente equivalente, que codifica para un polipéptido bifuncional con activida de trehalosa-6-fosfato sintasa y trehalosa-6-fosfato fosfatasa. 11.- Un vehículo molecular de expresión caracterizado porque comprende la secuencia de ADN de la reivindicación 1. 13.- Un huésped modificado genéticamente, caracterizado por contener la secuencia de ADN de la cláusula 1 o una mutación funcionalmente equivalente. 15.- Un huésped modificado genéticamente de conformidad con cualquiera de las cláusulas 13 ó 14, caracterizado porque dicho huésped es una planta o una de sus partes, una levadura o una bacteria. 20.- Un polipéptido SL-TPS/P caracterizado por presentar una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:2 o modificaciones funcionalmente equivalentes.

8 Exámen de fondo de la solicitud Búsqueda del Estado de la Técnica (artículo 53 de la LPI): Se buscó el gene sl-tps/p (SEQ ID NO: 1, 2 y 3) en los bancos de genes existentes (GENEBANK, EMBL DDBJ) y no se encontró que éste ya se hubiera dado a conocer. Literatura de patentes: US 5422254: “Method to increase the trehalose content of organisms by transforming them with the structural genes for the short and long chains of yeast trehalose synthase”. 1995 Literatura no-patente: Se encontraron 31 artículos científicos que mencionan a los genes de la trehalosa- 6-sintasa o fosfatasa, ninguno de ellos describe los genes de S. lepidophylla que codifican para la trehalosa-6-sintasa o fosfatasa ni organismos genéticamente modificados que contuvieran trangenes que codifican para la trehalosa-6-sintasa o fosfatasa de plantas distintas a S. lepidophylla. Sólo se mencionan los datos y genes que fueron descritos en la solicitud de patente Mexicana.

9 Análisis de los Requisitos de Ley (Emisitón de requisitos) Claridad/ Soporte en la descripción/ habilitación/ reproducibilidad (art 47 de la LPI y 28 y 29 del RLPI) nLa descripción es clara, menciona el estado de la técnica más cercano, menciona el problema existente, la mejor forma de llevar a cabo la invención reclamada (solución al problema técnico), menciona el origen del recurso genético, proporciona ejemplos de trabajo en donde se demuestra con evidencias lo que se pretende proteger. Por lo tanto la descripción es clara y habilitante. LLas reivindicaciones pretenden la protección de materia que va más allá de la materia descrita, por ejemplo, no se demuestra que todo tipo de plantas transgénicas puedan dar origen al fenotipo reclamado ni que produzan la trehalosa ya que sólo presenta evidencias de la obtención de microorganismos genéticamente modificados (bacterias y hongos) y de plantas de tabaco transgénicas conteniendo el gene sl-tps/p. Por ende las reivindicaciones, si bien son claras, no se consideran habilitantes, ni con soporte en la descripción y por ende no cumplen con lo estabelcido en los artículos 47 de la LPI y 28 y 29 del RLPI.

10 Análisis de los Requisitos de Ley Novedad (art 12 fracc. I y art. 16 de la LPI) DDado que en el estado de la técnica no se describe ni se da a conocer la secuencia del gene sl-tps/p de S. lepidophylla, vectores genéticos conteniendo dicho gene, ni la proteína codificada por tal gene, por lo tanto el gene, los vectores y las proteínas codificadas se consideran nuevos y por ende cumplen con lo establecido en los artículos 16 y 12 fracc. I de la LPI. nDado que en el estado de la técnica no se describe ni se da a conocer la obtención de organismos transgénicos conteniendo al gene sl-tps/p de S. lepidophylla, por lo tanto los organismos reclamados se consideran nuevos y por ende cumplen con lo establecido en los artículos 16 y 12 fracc. I de la LPI.

11 Respuesta a requisitos (folio 54890) Los solicitantes, en respuesta a las objeciones elevadas en el examen de fondo, modificaron el capítulo reivindicatorio de tal forma que ahora se reclama únicamente la materia que durante dicho examen se ha considerado nueva, inventiva, y con soporte/habilitación: 1.- Un fragmento de ADN aislado y purificado caracterizado poque consiste de la secuencia SEQ ID NO:1 o un mutante funcionalmente equivalente del mismo, que codifica para un polipéptido bifuncional con activida de trehalosa-6-fosfato sintasa y trehalosa-6-fosfato fosfatasa. 11.- Un vector de expresión caracterizado porque comprende la secuencia de ADN de la reivindicación 1. 13.- Un huésped modificado genéticamente, caracterizado que contiene la secuencia de ADN de cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 5 o un mutante funcionalmente equivalente de las mismas, caracterizado poque dicho huésped es una planta de tabaco, una levadura o una bacteria. 20.- Un polipéptido SL-TPS/P caracterizado por presentar una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:2 o un mutante funcionalmente equivalente de la misma.

12 Respuesta a requisitos (folio 54890) Dado que la materia ahora reclamada cumple con los requisitos establecidos en la LPI, por lo tanto se emitió el ofico de “favorable de fondo”, y subsecuentemente se otorgó el Título de Patente correspondiente.