Pruebas bioquímicas: O-F ~ metabolismo oxidativo

Presentación del tema: "Pruebas bioquímicas: O-F ~ metabolismo oxidativo"— Transcripción de la presentación:

1 Pruebas bioquímicas: O-F ~ metabolismo oxidativo

2 Pruebas bioquímicas: O-F ~ metabolismo oxidativo

3 Pruebas bioquímicas: Medio O-F~ metabolismo fermentativo

4 Pruebas bioquímicas: Gelatina~ positivo

5 Pruebas bioquímicas: Movilidad~ positivo

6 Pruebas bioquímicas: Test de oxidasa~positivo

7 Pruebas bioquímicas: Test de oxidasa ~positivo

8 Pruebas bioquímicas: Test de oxidasa~positivo

9 Pruebas bioquímicas: Medio de Mac Conkey~ colonias rosadas lactosa positivas

10 Pruebas bioquímicas: Medio de Mac Conkey~ colonias rosadas lactosa positivas

11 Pruebas bioquímicas: Medio de lactosa rojo fenol~ colonias lactosa positivas

12 Pruebas bioquímicas: Medio de lactosa rojo fenol~ Colonias lactosa positivas

13 Pruebas bioquímicas: Citrato de Simons~negativo
Este medio indica la capacidad de las bacterias de metabolizar el citrato. Contiene citrato como única fuente de carbono, fosfato de amonio como única fuente de fosfato y azul de bromotimol como como indicador de pH. Únicamente las bacterias capaces de metabolizar citrato podrán multiplicarse en este medio, al utilizar los fosfatos presentes liberan iones amonio (básicos) que junto con la eliminación de citrato (ácido) generará una fuerte basificación del medio que será aparente con un cambio de color del indicador de pH de verde a azul..

14 Pruebas bioquímicas: Citrato de Simons~negativo
Prueba de citratos (+) izquierda, (-)derecha.Utilización de Citrato como única fuente de carbono. Indicador de pH: azul de bromotimol.

15 Enterotubos

16 Pruebas bioquímicas: Rojo de metilo~positivo Para la realización de estas dos pruebas se cultiva el microorganismo en caldo RMVP (medio de Clark y Lubs) y se incuba a 30ºC durante un periodo de 3 días como mínimo y como máximo. Al revelar las pruebas, se separa el cultivo en dos porciones de unos ,5ml que servirán para cada uno de los ensayos. Rojo de Metilo: A uno de los tubos se le añade unas gotas (4-5) de solución indicadora de Rojo de Metilo. Se agita para homogeneizar y se observa la coloración. Se considera positiva si vira al rojo y negativa si permanece amarillo.

17 Pruebas bioquímicas: Voges-Proskauer~negativo
Las enterobacterias son anaerobios facultativos que utilizarán la glucosa en 2 fases: 1. Metabolismo aeróbico (respiración oxibióntica) consumiendo rápidamente el oxígeno del medio 2. Metabolismo anaeróbico (fermentación) que puede ser de 2 tipos dependiendo de los productos finales obtenidos:      2.1 fermentación ácido-mixta: productos finales son ácidos orgánicos (fórmico, acético, láctico y succínico) y etanol      2.2 fermentación butilén glicólica: productos finales son compuestos neutros como el butanodiol y el etanol, produciéndose acetoína como intermediario. La liberación de ácidos orgánicos  generará un acusado descenso del pH que podrá ser detectado añadiendo al medio un indicador de pH como el rojo de metilo (rojo a pH 4.0). Si la fermentación que se ha llevado a cabo produce acetoína puede ser detectada añadiendo al medio KOH y alfa-naftol que reaccionarán con este compuesto produciendo rojo característico.

18 Pruebas bioquímicas: Voges-Proskauer~negativo

19 Pruebas bioquímicas: Ornitina~positivo
Descarboxilasas de aminoácidos (arginina, lisina, ornitina) Los aminóacidos al perder el grupo carboxilo se convierten en aminas lo que incrementa el pH del medio y el indicador (púrpura del bromocresol) vira a violeta. Las descarboxilasas son útiles en la diferenciación de enterobacterias. Las bacterias se inoculan en medios complejos que contienen lisina, ornitina o arginina al 1% y un indicador de pH (púrpura de bromocresol).

20 Pruebas bioquímicas: Ornitina~positivo

21 Sistema API para enterobacterias

22 Pruebas bioquímicas: Fermentación de H. de Carbono Glucosa~positivo

23 Pruebas bioquímicas: Fermentación de H. de Carbono Manosa~negativo

24 Haemophilus-influenzae Satelitismo con Staphilococcus aureus

25 Pruebas bioquímicas: Fermentación de H
Pruebas bioquímicas: Fermentación de H. de Carbono Glucosa~positivo (con formación de gas)

26 Pruebas bioquímicas: Prueba de indol~positiva
Mediante esta prueba se detecta la liberación de indol en un cultivo bacteriano. Dicha liberación se debe a la degradación del aminoácido triptófano mediante el enzima triptofanasa. Para la realización de esta prueba la bacteria se cultiva durante horas en un caldo de triptona con NaCl al 0,5% (la triptona presenta abundante triptófano). Para la posterior detección del indol se usa el reactivo de Kovacs que se puede preparar con los siguientes ingredientes: Alcohol amílico o isoamílico (puede sustituirse por alc.butílico) ml p-dimetilamino-benzaldehído g HCl (concentrado) ml Se disuelve primero el aldehído en el alcohol y después se agrega lentamente a esta mezcla el ácido. Para el control de calidad del reactivo se pueden utilizar cultivos conocidos. Las más convenientes son Escherichia coli (indol+) y todas las especies de Klebsiella (indol-).

27 Pruebas bioquímicas: Prueba de indol~positiva

28 Pruebas bioquímicas: Prueba de fenilalanina~positiva
Esta prueba determina la capacidad de un organismo para desaminar el aminoácido fenilalanina en ácido fenilpirúvico por su actividad enzimática de fenilalanina desaminasa, con la consiguiente acidez resultante. Se cultiva el microorganismo en agar fenilalanina sembrando la superficie con abundante inóculo e incubando durante horas. Seguidamente se añade 0,2ml de una solución de cloruro férrico al 10% de manera que inunde todo el crecimiento. La presencia de ácido fenilpirúvico (prueba positiva) se manifiesta por la aparición de un color característico verde oscuro o verde-azulado.

29 Pruebas bioquímicas: Prueba de fenilalanina~positiva

30 Test de catalasa ~ positivo
Pruebas bioquímicas: Test de catalasa ~ positivo + -

31 Test de coagulasa~positivo
Pruebas bioquímicas: Test de coagulasa~positivo

32 Pruebas bioquímicas: Test de catalasa ~ negativo

33 Fermentación de manitol~positivo
Pruebas bioquímicas: Fermentación de manitol~positivo

34 Prueba de la DNAsa Se basa en la presencia de la enzima termoestable DNAsa que es capaz de clivar los enlaces fosfodiester internos de la molécula de DNA. Se utiliza un medio sólido que contiene verde de metilo el cual se combina con DNA altamente polimerizado. Cuando la combinación no ocurre, por acción de la enzima DNAsa, se produce una decoloración del medio.

35 Pruebas bioquímicas: Prueba de optoquina ~ negativo

36 Pruebas bioquímicas: Bilis esculina~ negativo

37 Pruebas bioquímicas: Bilis esculina~ positivo

38 Pruebas bioquímicas: Fermentación de carbohidratos~manitol (API)

39 Pruebas bioquímicas: Prueba de bacitracina ~positivo (A)

40 Prueba de CAMP- positiva (B)
Se basa en que los estreptococos(B) producen un factor llamado CAMP (factor de mono- fosfato de adenina cíclica) que aumenta la zona de hemólisis producida por un estafilococo productor de ß lisina

41 Pruebas bioquímicas: Sal tolerancia~ positivo

42 Pruebas bioquímicas: Producción de ácido a partir de: glucosa ~ positivo maltosa ~ positivo lactosa ~ negativo