Descargar la presentación
La descarga está en progreso. Por favor, espere
2
v = c/l E = hv
20
S2 S1 Energía S0 Diagrama de Jablonski Conversión interna (10-12 s)
Absorción (10-15 s) Fluorescencia (10-9 s-10-8 s) Nr S0 Corrimiento de Stokes : emisión > absorción
21
Relajación del solvente
Diagrama de Jablonski Conversión interna S2 Relajación del solvente (10-10 s) (10-12 s) S1 Energía Absorción (10-15 s) S0 Corrimiento de Stokes : emisión > absorción
22
Absorción G relajación térmica relajación térmica Fluorescencia
33
Quantum yield
36
Tiempo de vida
38
Quenching the fluorescencia
Puede ser estático o dinámico
41
Resonance Energy Transfer
46
FLUORÓFOROS INTRÍNSECOS
Triptofano es el fluoróforo intrínseco dominante. Trp es muy sensible al entorno. Es posible ver cambios en los espectros de emisión en respuesta a cambios conformacionales, asociación de subunidades, unión de sustratos, desnaturalización y cualquier cosa que afecte el entorno local del anillo indol. Trp es muy sensible a la atenuación colisional, tanto por grupos externos como por grupos vecinos, en la proteína. Trp puede ser excitado selectivamente a 295 nm. (para evitar la excitación de la Tyr).
47
Trp 48 Azurina 4AZU max= 308nm Trp 48 Proteína G max= nm Trp 25 Glucagon 1GCN max nm
57
Fluoróforos extrínsecos
* fluorescencia (no polar) absorción _ + et Transferencia electrónica S1 ct S0 np (estable en ambiente polar) fluorescencia (ambiente polar) S1 (no polar) Variación en el rendimiento cuántico del ANS
58
U ESβL9 (5 M GdmCl) IP ESβL9 N ESβL9 (0.05 M GdmCl)
N-terminal C-terminal Esquema de la estructura de la ‑lactamasa. Se muestran las hélices C y N terminales.
59
Longitud de onda Fluorescencia
Presentaciones similares
© 2024 SlidePlayer.es Inc.
All rights reserved.