La descarga está en progreso. Por favor, espere

La descarga está en progreso. Por favor, espere

FOTOLUMINISCENCIA MOLECULAR Graciela M. Escandar.

Presentaciones similares


Presentación del tema: "FOTOLUMINISCENCIA MOLECULAR Graciela M. Escandar."— Transcripción de la presentación:

1 FOTOLUMINISCENCIA MOLECULAR Graciela M. Escandar

2 FLUORESCENCIA luz incandescente luz ultravioleta

3 FOSFORESCENCIA 1:00:001:00:30 1:10:40

4 RELAJACIÓN NO-RADIANTE LUMINISCENCIA singlete singlete* triplete* So S1S1 S2S2 ABSORBANCIA So S1S1 S2S2

5 Fluorescencia molecular Es un proceso de fotoluminiscencia en que las moléculas se excitan por absorción de radiación electromágnética. La especie excitada posteriormente se relaja hasta el estado fundamental, con la liberación de su exceso de energía en forma de fotones

6 ABSORCIÓN CI F CS CE P S2S2 S0S0 ENERGíAENERGíA S1S1 T1T1 RV DIAGRAMA DE ENERGÍA (Jablonski)

7 solvente estructura temperatura LUMINISCENCIA EN SOLUCIÓN concentración tipo de transición apagadores químicos pH Factores que influyen en la señal fluorescente

8 tipos de transición estructura n Compuestos aromáticos, estructuras con dobles enlaces conjugados, anillos aromáticos fusionados. Rigidez. Sustituyentes bifenilo CH2CH2 fluoreno Factores que influyen en la señal fluorescente

9 Su aumento, disminuye la intensidad de fluorescencia por aumento de probabilidad de conversión externa temperatura solvente Efectos generales y específicos Factores que influyen en la señal fluorescente

10 La fluorescencia de compuestos aromáticos con propiedades ácido- base es generalmente pH-dependiente N N HH N HHHH + anilina N HH H + ion anilinio pH Apagamiento dinámico y estático apagadores químicos Factores que influyen en la señal fluorescente

11 F EXCITACIÓNEMISIÓN BANDAS DEL ESPECTRO Corrimiento de Stokes

12 F RAYLEIGH RAMAN F RAYLEIGH 2° orden RAMAN 2° orden RAYLEIGH S0S0 S1S1 RAMAN BANDAS DEL ESPECTRO

13 I F = I A = = (I o – I T ) = = I o (1– I T /I o ) = = I o (1 – e bC ) = I F = I o (1 – e -kbC ) ANÁLISIS CUANTITATIVO = N o fotones emitidos/N o fotones absorbidos = IF/IAIF/IA

14 I F = I o (1– 1 + kbC) = I o kbC I F = KC Recordando que: x x 2 x 3 1! 2! 3! si x es muy pequeño: e -x = 1-x e -x = K ANÁLISIS CUANTITATIVO I F = I o (1 – e -kbC )

15 F C I F = KC I F vs C (a bajas concentraciones de analito) ANÁLISIS CUANTITATIVO

16 ESPECTROFLUORÍMETRO monocromador M fotomultiplicador de muestra fotomultiplicador de referencia amplificador dispositivo de lectura atenuador del haz fuente

17 OBTENCIÓN DE ESPECTROS DE EXCITACIÓN Y EMISIÓN 1) Obtención del espectro de absorbancia para determinar la longitud de onda de absorción F EXCITACIÓN EMISIÓN 2) Fijar el monocromador de excitación a esta y obtener el espectro de emisión 3) Fijar el monocromador de emisión a la seleccionada en el punto 2 y obtener el espectro de excitación.

18 CAUSAS DE DESVÍO DE LINEALIDAD F C Término lineal Lineal+cuadrático Lineal+cuadrático+cúbico Si kbC es grande (absorbancia 0.02) IF = Io [kbc – (kbc) 2 2 (kbc) ] I F = I o (1 – e -kbC )

19 FILTRO INTERNO Producido por el propio analito (alta concentración) - Variación de potencia de luz incidente en el trayecto - Autoapagamiento - Autoabsorción Afecta la linealidad de la curva de calibrado y el perfil de los espectros de excitación y/o emisión Producido por otra sustancia - Sustancia que absorbe en la región de de excitación o emisión del analito

20 FILTRO INTERNO Excitación Detección de la emisión Alta concentración: la emisión disminuye en el trayecto de la luz incidente Detección de la emisión Baja concentración: emisión uniforme

21 Curva de calibración de sulfato de quinina ppm F F ppm Linealidad Término cúbico o mayor Filtro interno


Descargar ppt "FOTOLUMINISCENCIA MOLECULAR Graciela M. Escandar."

Presentaciones similares


Anuncios Google