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405 543 633 488 UV 405 LASERSFUENTES UNIDAD DE BARRIDO Abajo : 405/488/543 Arriba : 633/488/543 Llave Vertical (dos posiciones, una para cada set de.

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2 UV 405 LASERSFUENTES

3 UNIDAD DE BARRIDO Abajo : 405/488/543 Arriba : 633/488/543 Llave Vertical (dos posiciones, una para cada set de lásers) X X No tocar!! (Se desalinean los lásers).

4 Laser Llave de filtros - adentro: se interpone el filtro afuera: no se filtra Llave de filtros Canal 2Canal > >510 Llave de Espejo Dicroico >570< 570 Laser 488 Llave vertical Objetivo Plano del preparado Laser 405 (UV) Laser 633 Abajo Arriba

5 Llave de Espejo Dicroico Tres posiciones, para seleccionar con cuál canal se va a detectar la emisión: - Adentro: Canal 1 - Afuera: Canal 2 - Intermedia: Ambos ( 570 va a Canal 2). Llaves de filtros Para filtrar la luz emitida según el espectro del fluoróforo. Dos posiciones: adentro: se interpone el filtro afuera: no se filtra Los filtros instalados son: Canal 1: (por ej DAPI)Canal 2 : (por ej. TRICT) >510 (por ej. FICT)>660 (por ej. Cy5) Llave Vertical Dos posiciones, una para seleccionar con qué set de lásers se va excitar la muestra: Abajo : 405 – 488 – 543 Arriba : 633 – 488 – 543 En suma: NOTAR QUE: Si está acostumbrado a chequear con el software la configuración, tenga en cuenta que para FICT y afines le va a seguir indicando los filtros 510 y 530, aunque ahora sólo usaremos el 510

6 Hay 10 combinaciones posibles Las 7 combinaciones básicas y 3 más Las 7 básicas se pueden combinar en simultaneo con luz transmitida

7 Llave vertical Filtro Rojo ( ) Opción 1: Quiero ver una marcación Con texas red o similar (rojo) Láser 543 prendido Llave vertical irrelevante Shutter abierto (software) Registro en canal 2 (Llave Espejo Dicroico Afuera) Filtro Rojo activo objetivo Plano del preparado Canal 2 >570 Llave de Espejo Dicroico: Afuera

8 Laser 488 objetivo Plano del preparado Opción 2: Quiero ver una marcación Con FITC o similar (verde/amarillo) Laser 488 prendido Llave vertical irrelevante Shutter abierto (software) Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro) Filtro Verde Activo Canal 1 >510 < 570 Llave de Espejo Dicroico: Adentro

9 Opción 3: Quiero ver azul (i.e. DAPI) Laser UV prendido Llave vertical abajo Shutter abierto (software) Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro) Filtros azul activo Laser uv Llave vertical objetivo Plano del preparado Canal 1 < 570 Llave de Espejo Dicroico: Adentro

10 Opción 4: Quiero ver Rojo lejano Laser 633 prendido Llave vertical para arriba Shutters abierto (software) Registro en canal 2 (Llave Espejo Dicroico Afuera) Filtro rojo lejano activo Plano del preparado Laser 610 Laser 633 Llave vertical objetivo Filtro Rojo (> 660) Canal 2 > Llave de Espejo Dicroico: Afuera >660

11 Laser 488 Laser 633 Llave vertical Opción 5: Quiero ver doble marcado FITC y Rojo lejano Laser 633 prendido Laser 488 prendido Llave vertical para arriba Shutters abiertos (software) Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros rojo lejano y verde activos objetivo Plano del preparado Canal 2Canal 1 Llave de Espejo Dicroico: Intermedia >570 < 570 >510 >660

12 >510 Laser 488 objetivo Plano del preparado Opción 6 (menos especifica que la anterior): Quiero ver doble marcado Con texas red o similar (rojo) Y con FITC o similar (verde amarillo) Laser 488 prendido Laser 543 prendido Llave vertical irrelevante Shutters abiertos (software) Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros Rojo y Verde activos Canal 2Canal 1 Llave de Espejo Dicroico: Intermedia >570 < 570

13 Laser 546 Laser UV Llave vertical Opción 7 : Quiero ver texas red y fluorescente azul (i.e. DAPI) Decir los problemas Laser UV (405) prendido Laser 543 prendido Llave vertical para abajo Shutters abiertos (software) Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros azul y rojo activos objetivo Plano del preparado Canal 2Canal 1 Llave de Espejo Dicroico: Intermedia >570 <

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15 Tres opciones mas Dos de triple marcado y una de cuádruple marcado

16 Opción 8 (para triple marcado): Quiero ver FITC, Rojo lejano y AZUL Láser 633, 488 y UV (405) prendidos Primera pasada Shutters 633 y 488 abiertos (software) Filtros rojo y verde activos Llave vertical para arriba Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Segunda pasada Llave vertical para abajo Shutters UV (405) abierto (software) Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro) Filtro Azul activo Laser 610 Laser 488 Laser 633 Llave vertical objetivo Laser UV Llave vertical objetivo Plano del preparado >510 > Canal 2Canal 1 >570 < 570

17 2 fluorocromos y luz transmitida

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19 Opción 9 (poco probable porque TxR y Rojo lejano cerca): Quiero ver texas red, rojo lejano y azul (i.e. DAPI) Laser UV (405), 543 y 633 prendidos Primera pasada Llave vertical para abajo Shutters UV, 543 abiertos (software) Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros azul y rojo activos Segunda pasada Llave vertical para arriba Shutter 633 abierto Registro en canal 2: (Llave Espejo Dicroico Afuera) Filtro rojo activo Laser uv Laser 546 Laser UV Llave vertical objetivo Laser 610 Laser 633 Llave vertical objetivo Plano del preparado >660 Canal 2Canal 1 >570 < 570

20 Laser 610 Laser 488 Laser 633 objetivo Llave vertical Opción 10: Ud es exigente y quiere ver todo Todos los Lasers prendidos Primera pasada Shutters 546 y UV abiertos Llave vertical para abajo Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros Rojo y UV activos Segunda pasada Shutters 633 y 488 abiertos Llave vertical para arriba Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros rojo lejano y verde activos o si Ud prefiere al revés puede ser también Laser uv Laser 546 Laser UV Llave vertical objetivo Plano del preparado Canal 2Canal 1 >570 < 570

21 Sequential scan con canales virtuales 3 o 4 fluorocromos y luz transmitida NOTAR que el programa no acepta ingresar más de dos fluorocromos, el tercero se especifíca después (cuando se agrega el canal virtual)

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25 Si tiene cualquier duda o piensa que necesita algún cambio de configuración CONSULTE a la COMISIÓN. No haga cambios sin avisar al resto!! Así evitaremos pérdida de tiempo y hasta de preparados de todos.

26 Por cualquier consulta a la hora de usar el microscopio me peden encontrar de lunes a jueves de 13 a 17hs y los viernes de 9 a 13 hs en el interno 123 del IIBCE. Mi mail es Marcela Díaz Investigadora contratada Grado 1 del servicio de microscopia confocal IIBCE


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