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Regulación de la expresión genética en plantas. Activación del ciclo del glioxilato durante la germinación de semillas.

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Presentación del tema: "Regulación de la expresión genética en plantas. Activación del ciclo del glioxilato durante la germinación de semillas."— Transcripción de la presentación:

1 Regulación de la expresión genética en plantas. Activación del ciclo del glioxilato durante la germinación de semillas.

2 Objetivos Comparar el contenido de lípidos, carbohidratos y proteínas en semillas de ajonjolí germinadas y sin germinar. Conocer un mecanismo de modificación de la expresión genética en eucariontes. Asociar cambios fisiológicos con cambios en la expresión de proteínas. Integración del metabolismo primario. Integración de los conocimientos adquiridos durante el curso.

3 Cambios fenotípicos durante el ciclo de vida de una planta.

4 En la semilla se almacenan las reservas necesarias para el desarrollo de una planta. Carbohidratos Almidón Amilosa + Amilopectina Hemicelulosas Lípidos Triacilgliceroles Proteínas

5 El contenido de moléculas de reserva determina el metabolismo primario de la semilla durante la germinación.

6 Transición de semilla a plántula 1.Hidratación 2.Salida de la raíz primitiva o radícula 3.Salida de los cotiledones o el tallo (coléptilo) 4.Enverdecimiento de las hojas (cloroplastos)

7 Una vez que la planta emerge del suelo se vuelve fotosintéticamente activa. Heterotrófo: Metabolismo dependiente de las reservas de carbono, nitrógeno, fósforo… que se encuentran en diferentes tejidos de la semilla. Autótrofo: La planta es fotosintéticamete activa. H A

8 Durante la etapa de heterótrofo ocurre la movilización de moléculas de reserva. En el caso de la mayoría de las semillas que contienen lípidos se induce el CICLO DEL GLIOXILATO

9 Las células vegetales y las de algunos microorganismos pueden realizar la síntesis neta de carbohidratos a partir de grasas a través del ciclo del glioxilato.

10 Fases de la degradación de ácidos grasos

11 Ciclo del glioxilato. Permite la movilización de grasas de almacenaje a carbohidratos solubles 1. Vía que se parece a la del ciclo de Krebs pero… 2. Evita las descarboxilaciones (No hay pérdida de C como CO 2 ) 3. Y tiene: ENZIMAS REGULATORIAS Isocitrato liasa Malato sintasa

12 Ciclo del glioxilato Es la vía metabolica por la cual 2 moléculas de acetil-CoA se convierten en 1 molécula de succinato, teniendo como un intermediario al glioxilato. El succinato se convierte en oxalacetato y es usado durante la gluconeogenesis para generar glucosa y de ahí sacarosa. Los animales no pueden convertir los ácidos grasos en glucosa ya que no tienen las enzimas necesarias para sintetizar oxaloacetato desde el acetil CoA.

13 Transición del metabolismo heterotrófico a uno fotoautotrófico Heterotrófo Fotoautotrófo

14 La actividad del ciclo del glioxilato durante la germinación y post-germinación está regulada a nivel transcripcional Germinación Postgerminación RNAm El ciclo del glioxilato se inhibe una vez que la planta es autótrofa.

15 Si no se encuentran las enzimas claves del ciclo del glioxilato los ácidos grasos se oxidan vía el ciclo de Krebs y la fosforilación oxidativa hasta CO 2 y H 2 O.

16 Comparación de la frecuencia de germinación entre la planta WT y la planta mutante en la vía de la oxidación (ped1-3).

17 En la oscuridad se induce la transcripción del gen de la malato sintasa. CONTROL METABÓLICO

18 Durante la senescencia también se induce la malato sintasa Transición de tejido con capacidad autotrófica a heterotrófica

19 Sacarosa reprime la inducción de las enzimas del ciclo del glioxilato

20 La práctica. Semillas de ajonjolí (Sesamum indicum) Extracción de proteínas Determinación de proteínas: Bradford Medición de actividad enzimática: Malato sintasa Piruvato cinasa Extracción de lípidos Separación por cromatografía en placa fina Extracción de carbohidratos Cuantificación colorimétrica: Método fenol-sulfúrico Germinación por 0 y 3 días

21 Ejercicios

22 Se utilizaron enzimas de restricción para la digestión completa del plásmido pBR32. ¿Cómo será el corrimiento electróforético en los siguientes casos? Sin digerir Restricción con Enzima BamHI Restricción con BamHI y ScaI

23 Se quiere clonar el gen que codifica para una quitinasa en el plásmido pBR322, Se sabe que este gen tiene en sus extremos 5´ y 3´ sitios de reconocimiento para Pstl. La cepa en la que se realizará la transformación es susceptible a tetraciclina y a ampicilina. ¿Cómo será el fenotipo de la bacteria transformada?

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