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Identificación De Tubulina Beta En El Citoplasma De Los Trofozoitos De Entamoeba Histolytica. Autores: Perla Verónica Reynoso Arenas John Hernández Flores.

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1 Identificación De Tubulina Beta En El Citoplasma De Los Trofozoitos De Entamoeba Histolytica. Autores: Perla Verónica Reynoso Arenas John Hernández Flores René Moreno Morales Asesor: Dr. Eduardo Gómez Conde.

2 PROBLEMA Se sabe que la tubulina beta participa en la formación de los microtúbulos del huso mitótico. Sin embargo, se desconoce si esta tubulina se encuentra en el citoplasma de dichos parásitos y la función que desempeña. OBJETIVO El propósito de este trabajo fue identificar la tubulina beta en el citoplasma de los trofozoitos de E. histolytica, pues hasta el momento no hay ningún reporte científico de ello. Laboratorio de Investigación en Inmunobiología, Facultad de Medicina – BUAP

3 ANTECEDENTES ESPECIFICOS Los estudios sobre el huso mitótico del núcleo de los trofozoitos de Entamoeba histolytica han demostrado la participación de la tubulina en la polimerización de los microtúbulos, estos últimos observados también por microscopia electrónica de transmisión jpeg

4 Entamoeba Quiste Trofozoito Amebiasis caracterizada por: Diarrea mucosa Diarrea sanguinolenta Escalofríos Malestar General

5

6 MEMECANCANIISMOSSMOSPPAATOGENTOGENOOSSMEMECANCANIISMOSSMOSPPAATOGENTOGENOOSSIPAOS AB DC

7 MEMECANCANIISMOSSMOSPPAATOGENTOGENOOSSMEMECANCANIISMOSSMOSPPAATOGENTOGENOOSSIPAOS AB D E C F Destaca principalmente su gran capacidad de movilidad.

8 En el mecanismo de la movilidad están involucradas moléculas como actina y miosina, presentes en los lamelipodios y estomas endociticos. Se ha demostrado que la alfa y beta tubulina están involucradas en la polimerización de los microtúbulos citoplasmicos y polimerización del huso mitótico en células eucariotas superiores TUBULTUBULINAINABETABETATUBULTUBULINAINABETABETA

9 MATERIALES Y MÉTODOS Parásitos y condiciones de cultivo. Trofozoitos de Entamoeba histolytica cepa HMI:IMMS, en la fase logarítmica de crecimiento los cuales se cultivaron en medio TYI- S33 suplementado con suero de bovino adulto al 10% e incubados a 37°C. Identificación de tubulina beta citoplásmica. Se cultivaron trofozoitos de Enthamoeba Histolytica cepa HM1-IMSS en medio se cultivo TYI-S33 a 37°C por 72 hrs. Posteriormente se llevaron a cabo las tinciones e incubaciones necesarias con anticuerpos marcados. Los resultados se observaron en el microscopio de fluorescencia y se capturaron imágenes con la cámara Motic. MEMECANCANIISMOSSMOSPPAATOGENTOGENOOSSMEMECANCANIISMOSSMOSPPAATOGENTOGENOOSSIPAOS

10 IDENTIFICACIÓN DE TUBULINA BETA CITOPLÁSMICA Microscopia de Nomarski Los parásitos crecieron en una caja de cultivo y fueron lavados con 0.1 M de Buffer Sodio Fosfato (PBS) pH 7.3 a 37°C, más tarde los parásitos fueron fijados con para formaldehido al 4% en PBS al 0.1 M, pH 7.3, a 37°C por 15 minutos. Laboratorio de Investigación en Inmunobiología, Facultad de Medicina – BUAP

11 IDENTIFICACIÓN DE TUBULINA BETA CITOPLÁSMICA. Proceso de Identificación Fijados en cubreobjetos Lavados con PBS Enjuagados con 0.1 M Tris-HCL Muestras son incubadas con 1% de RNAsa Lavadas con PBS Incubados con una dilución de Anticuerpos policlonales Incubados con los anticuerpos secundarios Contrastado con 0.01% de yoduro de propilio Montado en un portaobjetos con FluoroGuard Observado con un microscopio de epifluorescencia 1 2

12 2c n 2b n 2a

13 Se identificó la tubulina beta citoplasmática en los trofozoitos de Entamoeba histolytica

14 Acta Microscopica Vol 16 No1-2,(Supp.2)2007 Durante los procesos de fagocitosis de eritrocitos, linfocitos y otras células, se observa que el estoma rodea progresivamente el contorno de la célula durante la fagocitosis.

15 Es probable que la participación de los microtúbulos formados por la tubulina, junto con la α funcione como un cinturón que va reduciendo el diámetro del borde del estoma

16 GRACIAS POR SU ATENCIÓN


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