AUTOMATIZACIÓN EN LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA

Presentación del tema: "AUTOMATIZACIÓN EN LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA"— Transcripción de la presentación:

1 AUTOMATIZACIÓN EN LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA
FACULTAD DE TECNOLOGIA MEDICA - EPLAP AUTOMATIZACIÓN EN LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA DOCENTES: Prof. José Bernaola Uchuya Dr. Carlos Prado Maggia Lic David Lazón Mansilla Lic. Wilmer William Cárdenas Mendoza INTEGRANTES: Aguilar Guimarey, Daniel Chumpitaz Fernández, Carmen Eche Navarro, Marylin Gutierrez Saavedra, Gianfranco Huarcaya Damiano, Jenifer Mendoza Lizana, Vanessa Salazar Córtez, Smilja Salazar Sánchez, Leticia Tejeda Recines, Patricia Tenorio Córdova, Diana Maria Vásquez Tafur, Diana

2 Introducción La automatización de laboratorios es una estrategia multidisciplinaria para investigar, desarrollar, optimizar y aprovechar las tecnologías en el laboratorio.

3 AUTOMATIZACION EN LABORATORIO DE HEMATOLOGIA
Concepto: Es el uso de sistemas o elementos computarizados, que se han ido perfeccionando poco a poco gracias a la investigación y desarrollando nuevas tecnologías para:

4 1. Aumentar la productividad.
2.Elevar la calidad de los datos experimentales. 3. Reducir tiempos de ciclo del proceso de laboratorio. . 4.Permitir la experimentación, que de otro modo sería imposible.

5 Métodos y principios con Dx

6 IMPEDANCIA ELÉCTRICA Se basa en la resistencia que ofrecen las células
Descrito y usado por Coulter en 1956 Se basa en la resistencia que ofrecen las células CUANDO Atraviesan un orificio de apertura que separa dos medios (positivo y negativo) Y al atravesar van a generar un cambio en la resistencia al cual llamaremos pulso

7 primero incorporan un sistema de corriente eléctrica
esto obliga a las células a fluir hacia la región sensible con una trayectoria bien definida Así evitando que las células pasen por el borde del orificio de apertura ¿CÓMO? O que las células retrocedieran o interfieran en la lectura de otras células que siguen

8 Los analizadores hematológicos modernos incorporan este sistema en el conteo de células
Esto es uno de los equipos que utiliza impedancia eléctrica en su recuento que es el Sysmex KX-21 

9 ENFOQUE HIDRODINÁMICO
PIPETA DE MUESTRA TUBO ATRAPADOR APERTURA REACTIVO DE CUBIERTA En el punto de encuentro, el fluido envolvente arrastra a las células que van llegando por el conducto interno, que se hace más estrecho en su extremo La muestra es forzada a través de la pipeta de muestra hacia adentro de la celda de flujo, es rodeada por un diluyente y pasa a través del centro de la apertura. El resultado final es que se crea una hilera de células que atravesarán el láser de una en una.

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11 RADIOFRECUENCIA-CORRIENTE DIRECTA
P A C I D A La relación núcleo/citoplasma de cada célula (OPACIDAD) junto con su estructura interna se mide por el pasaje de una corriente de RADIOFRECUENCIA. Esto permite discriminar a la células de similar tamaño pero de composición interna distinta.

12 DISPERSIÓN DE LUZ Cuando existen obstáculos, tales como partículas en el camino de la luz, el rayo de luz se dispersa de cada obstáculo en varias direcciones. Luz dispersada frontal y luz dispersada lateral De acuerdo a la emisión de la luz existen: Luz fluorescente lateral

13 DISPERSIÓN DE LUZ IMPORTANCIA: Detectando la luz dispersada, es posible obtener información sobre el tamaño y propiedades materiales de las células sanguíneas. Un rayo producido por un láser semiconductor es emitido hacia las células sanguíneas que pasan a través de la celda de flujo. La luz dispersada frontal es recibida por el fotodiodo, y la luz dispersada lateral y luz fluorescente lateral son recibidas por el tubo fotomultiplicador. Esta luz es convertida a pulsos eléctricos, haciendo posible obtener información sobre las células sanguíneas.

14 Es una técnica de análisis celular
CITOMETRÍA DE FLUJO Es una técnica de análisis celular permite la medida simultánea de múltiples características fisiológicas y químicas de una sola célula el cual Fundamento : se basa en hacer pasar una suspensión de partículas  (generalmente células) alineadas y de una en una por delante de un haz de láser focalizado

15 La citometría de flujo consta de tres diferentes componentes
Fluido óptica electrónica En el cual las células se transportan Responsable de la detección de la fluorescencia de las células Convierte las señales ópticas en señales digitales para el análisis computacional

16 Realización : La muestra de sangre es aspirada , diluida y teñida, luego se colocará en la celda de flujo Como las células pasan en línea a través del centro de la celda de flujo, se previene la generación de pulsos sanguíneos anormales y se reduce la contaminación que puede haber en la celda. Un rayo producido por un laser es emitido hacia las células sanguíneas que pasan a través de la celda de flujo. La luz dispersada frontal es recibida por el fotodiodo, y la luz dispersada lateral y luz fluorescente lateral son recibidas por el tubo fotomultiplicador. Esta luz es convertida a pulsos eléctricos , haciendo posible la obtención de la información sobre las células

17 M.C: MÉTODO DE LA PEROXIDASA
A los leucocitos se les incorpora el sustrato de la enzima (peróxido de hidrogeno ) y el cromógeno. Los leucocitos se tiñen , y su intensidad de color depende de la cantidad de peroxidasa que presente Proceso de lisis en los eritrocitos luego «Reacción citoquímia» En el resultado Cada célula queda representada gráficamente mediante un diagrama punteado de dispersión (citograma) tamaño (determinado por la dispersión de la radiación) En función en el que cada punto representa una célula intensidad del color (medido por la absorción de la radiación)

18 M.C: MÉTODO DE LA PEROXIDASA
El resultado final es el de un diagrama con al menos, cinco poblaciones leucocitarias diferentes: Los eosinófilos adquieren un color más intenso que los neutrófilos (mayor absorción y menor dispersión). Los neutrófilos inmaduros tienen mayor actividad peroxidasa que los maduros, por lo que absorben mayor cantidad de radiación. Los linfocitos se diferencia del resto por su escasa absorción y dispersión. Los linfocitos activados y los blastos producen una gran dispersión de la radiación, pero ya que no contiene peroxidasa no absorben radiación. Los monocitos son células de gran tamaño y poca actividad peroxidasa, por lo que producen gran dispersión y poca absorción de radiación

19 CITOGRAMA

20 FLUORESCENCIA Es el método más sofisticado y más sensible que emplea la automatización del diferencial como el inmunofenotipo (marcadores de superficie celular como el CD61 y CD41), la viabilidad celular o estudios de ARN (reticulocitos, plaquetas reticuladas), estudios de ADN (hematíes nucleados) entre otros.

21 En este método se utilizan fluorocromos
Un fluorocromo es una  molécula química que absorbe la luz a una determinada longitud de onda (ENERGIA ) energía de excitación y emite a una longitud superior (MENOR ENERGIA)  En este método se utilizan fluorocromos

22 Cómo se obtiene la luz fluorescente.
· Unión de sitios específicos con anticuerpos marcados con fluorocromos. · El fluorocromo absorbe energía del láser. · El fluorocromo libera energía absorbida por : Vibración y disipación del calor. · Emisión de fotones a una mayor longitud de onda llamada  fluorescencia.

23 REACTIVOS FLUORESCENTES
Las coloraciones fluorescentes como: El naranja de Thiazol. Polimetina Oxazina Estos colorantes tienen como característica, intercalarse en las cadenas de ácidos nucleídos. * Estos son usados por los fabricantes de reactivos dentro de los métodos acoplados a la dispersión de luz.

24 CAUSAS DE FALSO AUMENTO CAUSAS DE FALSA DISMINUCION
Fuentes de error Causas potenciales de resultados erróneos en analizadores hematológicos. PARAMETRO CAUSAS DE FALSO AUMENTO CAUSAS DE FALSA DISMINUCION hemoglobina Hemólisis Heparina hiperbilirubinemia Proteínas monoclonales Coágulo Sulfhemoglobina Hematocrito (automatizado) Plaquetas gigantes Hiperglicemia Crioglobulina Autoaglutinación Microcitosis Hematocrito (manual) Hiponatremia Plasma atrapado exceso de EDTA Hipernatremia plaquetas Inclusiones eritrocitos Fragmento leucocitarios Plaquetas agregados

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26 Principales analizadores hematológicos

27 Instrumento Pentra 120 DX-Fabricante ABX-Horiba
Emplea la tecnología ( Double Hidrodynamic Secuencial System Technology Measurement), la cual es una combinación de impedancia por doble enfoque hidrodinámico, medición de dispersión de luz y citoquímica. A la muestra que ha sido previamente incubada a una temperatura controlada se añade un colorante enzimático negro de Cloroazol; el cual tiñe específicamente el núcleo de los leucocitos, gránulos y membranas.

28 Cell Dyn Sapphire- Abbott
Emplea tecnología MAPSS (multi-angle polarized scatter separation) donde los leucocitos se diferencian en un solo paso. También incorpora un laser de helio- neón de 633 nm para análisis de citometría de flujo en múltiples ángulos y análisis de tamaño celular por impedancia. El resultado es una excelente diferenciación de leucocitos, células anormales, los agregados plaquetarios y el número de control de las mediciones es minimizado.

29 ADVIA 2120 -Es un sistema empleado para hemograma y el diferencial de células sanguíneas, estas se utilizan de manera selectiva en sangre total con EDTA. -El sistema ADVIA emplea tres tecnologías: citometría de flujo, citoquímica y dispersión de luz

30 Diferenciación de leucocitos
Se fija con formaldehído. Se tiñe la cámara de reacción con peroxidasa. Las temperaturas altas provocarán lisar a los hematíes y plaquetas; a los leucocitos se deshidratan. ADVIA 2120 En un medio hipertónico va producir crenación y contracción de las células blancas, así poder incrementar el índice de refracción lo q permitirá mejor identificación de los leucocitos sobre el ruido. Cuando se trazan los datos tanto de dispersión y absorción de luz se forman distintas poblaciones o grupos.

31 Diferenciación de eritrocitos Diferenciación de plaquetas
Va emplear las mediciones de la dispersión de luz láser en dos ángulos, esto permite un determinación precisa de los parámetros eritrocitarios. Se determina al mismo tiempo que los eritrocitos bajo el mismo canal y en las mismas condiciones técnicas. Al igual que en los eritrocitos se da con una medición de dos ángulos que va proveer gráficas bidimensionales, que va permitir la discriminación exacta de plaquetas frente a fragmentos celulares. Diferenciación de reticulocitos Se realiza mediante la medición de dispersión de luz en dos ángulos, y la absorción. Esto nos va permitir separar los eritrocitos no teñidos, de reticulocitos ARN- teñidos y la subclasificación de las distintas etapas de maduración.

32 SEX-SISTEMA DE HEMATOLOGIA CLASE X
Se ha basado en la fluorescencia mediante la citometría de flujo, optimizados para requisitos específicos XE- 2100:Realiza análisis de leucocitos, plaquetas, reticulocitos y el recuento exacto de hematíes nucleados. XT-1800i: incluye el recuento de células progenitoras hematopoyéticas. XE- 5000: Además de todos los métodos de conteo de células en la sangre, este sistema también ofrece la posibilidad de realizar el recuento de leucocitos y su diferenciación en otros líquidos corporales.

33 *Observación: En relación con el recuento de células sanguíneas los método manuales son la base d algunos métodos de referencia en el laboratorio hematológico, a los que aún es necesario recurrir cuando hay discrepancias con los métodos automatizados. Suelen también ser métodos de rutina en laboratorios pequeños de algunos países.

34 CONCLUSIONES: La automatización esta establecida firmemente dentro del laboratorio de hematología. Es una solución que combina varios procesos en un solo sistema que disminuye el riesgo de error asociado a la operatividad humana. La automatización en hematología tiene por visión, una reducción de costos, una mayor eficiencia, un aumento de productividad y además de permitir competir en un ambiente globalizado. Existen dos tipos de automatización según su funcionamiento: uno por impedencia y el otro por dispersión de luz, todos los equipos automatizados suministran dos tipos de resultados: un informe numérico y un informe gráfico (histograma)

35 G R A C I S