Autores: Perla Verónica Reynoso Arenas John Hernández Flores

Presentación del tema: "Autores: Perla Verónica Reynoso Arenas John Hernández Flores"— Transcripción de la presentación:

1 Identificación De Tubulina Beta En El Citoplasma De Los Trofozoitos De Entamoeba Histolytica.
Autores: Perla Verónica Reynoso Arenas John Hernández Flores René Moreno Morales Asesor: Dr. Eduardo Gómez Conde. Esta plantilla se puede usar como filtro de inicio para un álbum de fotos.

2 PROBLEMA Se sabe que la tubulina beta participa en la formación de los microtúbulos del huso mitótico. Sin embargo, se desconoce si esta tubulina se encuentra en el citoplasma de dichos parásitos y la función que desempeña. OBJETIVO El propósito de este trabajo fue identificar la tubulina beta en el citoplasma de los trofozoitos de E. histolytica, pues hasta el momento no hay ningún reporte científico de ello. Laboratorio de Investigación en Inmunobiología, Facultad de Medicina – BUAP

3 Introducción ANTECEDENTES ESPECIFICOS
Los estudios sobre el huso mitótico del núcleo de los trofozoitos de Entamoeba histolytica han demostrado la participación de la tubulina en la polimerización de los microtúbulos, estos últimos observados también por microscopia electrónica de transmisión.

4 Introducción Quiste Amebiasis caracterizada por: Diarrea mucosa
Entamoeba Quiste Trofozoito Amebiasis caracterizada por: Diarrea mucosa Diarrea sanguinolenta Escalofríos Malestar General

5 CICLO DE VIDA

6 ME CAN I SMOS P A TOGEN O S A B C D

7 Destaca principalmente su gran capacidad de movilidad.
CAN I SMOS P A TOGEN O S A B Destaca principalmente su gran capacidad de movilidad. C D E F

8 TUBUL INA BETA En el mecanismo de la movilidad están involucradas moléculas como actina y miosina, presentes en los lamelipodios y estomas endociticos. Se ha demostrado que la alfa y beta tubulina están involucradas en la polimerización de los microtúbulos citoplasmicos y polimerización del huso mitótico en células eucariotas superiores

9 ME CAN I SMOS P A TOGEN O S MATERIALES Y MÉTODOS
Parásitos y condiciones de cultivo. Trofozoitos de Entamoeba histolytica cepa HMI:IMMS, en la fase logarítmica de crecimiento los cuales se cultivaron en medio TYI-S33 suplementado con suero de bovino adulto al 10% e incubados a 37°C. Identificación de tubulina beta citoplásmica. Se cultivaron trofozoitos de Enthamoeba Histolytica cepa HM1-IMSS en medio se cultivo TYI-S33 a 37°C por 72 hrs. Posteriormente se llevaron a cabo las tinciones e incubaciones necesarias con anticuerpos marcados. Los resultados se observaron en el microscopio de fluorescencia y se capturaron imágenes con la cámara Motic.

10 Identificación de tubulina beta citoplásmica
PROCEDIMIENTOS Microscopia de Nomarski Los parásitos crecieron en una caja de cultivo y fueron lavados con 0.1 M de Buffer Sodio Fosfato (PBS) pH 7.3 a 37°C, más tarde los parásitos fueron fijados con para formaldehido al 4% en PBS al 0.1 M, pH 7.3, a 37°C por 15 minutos. Identificación de tubulina beta citoplásmica Laboratorio de Investigación en Inmunobiología, Facultad de Medicina – BUAP

11 Identificación de tubulina beta citoplásmica.
PROCEDIMIENTOS Proceso de Identificación Fijados en cubreobjetos Lavados con PBS Enjuagados con 0.1 M Tris-HCL Muestras son incubadas con 1% de RNAsa Lavadas con PBS Incubados con una dilución de Anticuerpos policlonales Incubados con los anticuerpos secundarios Contrastado con 0.01% de yoduro de propilio Montado en un portaobjetos con FluoroGuard Observado con un microscopio de epifluorescencia 1 2 Identificación de tubulina beta citoplásmica.

12 RESULTADOS 2c n 2b 2a

13 Conclusión Se identificó la tubulina beta citoplasmática en los trofozoitos de Entamoeba histolytica

14 Conclusión Durante los procesos de fagocitosis de eritrocitos, linfocitos y otras células, se observa que el estoma rodea progresivamente el contorno de la célula durante la fagocitosis. Acta Microscopica Vol 16 No1-2,(Supp.2)2007

15 Conclusión Es probable que la participación de los microtúbulos formados por la tubulina , junto con la α funcione como un cinturón que va reduciendo el diámetro del borde del estoma

16 GRACIAS POR SU ATENCIÓN