FUNDAMENTO Y PRINCIPIOS DEL METODO DE ELISA. Que es ELISA La técnica ELISA (Enzyme Linked Inmunoabsorvent Assay) se basa en la detección de un antígeno.

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1 FUNDAMENTO Y PRINCIPIOS DEL METODO DE ELISA

2 Que es ELISA La técnica ELISA (Enzyme Linked Inmunoabsorvent Assay) se basa en la detección de un antígeno inmovilizado sobre una fase sólida mediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una reacción cuyo producto, por ejemplo un colorante, puede ser medido espectofotométricamente La técnica ELISA (Enzyme Linked Inmunoabsorvent Assay) se basa en la detección de un antígeno inmovilizado sobre una fase sólida mediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una reacción cuyo producto, por ejemplo un colorante, puede ser medido espectofotométricamente

3 Dispositivos empleados en ELISA Fase solida Los lectores ELISA son espectrofotómetros

4 Fases de un ensayo ELISA

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6 Tipos de ELISA Directo Directo Indirecto Indirecto Sandwich Sandwich

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8 Elisa. Elisa. 1ª. Generación: Primeros ensayos usaban lisados de VIH purificado, a menudo les faltaba sensibilidad y especificidad. 2ª. Generación: Los ensayos mejorados basados en 2ª. Generación: Los ensayos mejorados basados en proteínas recombinantes y/o los peptidos sintéticos, que también permitieron la producción de VIH 1 y 2 combinado. 3ª. Generación: tipo sándwich, usan un antígeno 3ª. Generación: tipo sándwich, usan un antígeno marcado como conjugado, muy sensibles. 4ª. Generación: detectan antígenos y anticuerpos, 4ª. Generación: detectan antígenos y anticuerpos, reducen el período de ventana.

9 Enzimas p51/p66/p32/p10 Núcleo capsideo p17/p24/p6/p7 gp160 gp41 Glicoproteinas p55 gp120 Capsideo p24

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12 Substrato HIV-1y HIV-2Antigeno conjugado Anti-HIV-1 p24 conjugado Anti-1/ Anti-2 en la muestra de Px. HIV-1 p24 en muestra de pacientes Anticuerpos monoclonales anti-p24 HIV-2 antígeno unido a los micropososo HIV-1 antígeno unido a los micropososo