UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA

Presentación del tema: "UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA"— Transcripción de la presentación:

1 UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA
Métodos y Técnicas de Estudio en Biología Celular

2 UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA
Inmunoblotting (western blot), Dot/slot blot Inmunocitoquímica Inmunofluorescencia Inmunoprecipitación ELISA/EIA/RIA Cromatografía de inmunoafinidad Microscopia electrónica (morfología)

3 Estructura de los anticuerpos

4 Tipos de Anticuerpos

5 Selección clonal: Delección

6 Selección clonal: expansión

7 Conceptos Conceptos Inmunógeno, antígeno. Carrier: BSA, KLH.
Unión covalente (cross-linking): MBS, glutaraldehido, DSS. Péptidos inmunogénicos Proteínas nativas y desnaruralizadas. Otras moléculas Adjuvante de Freund: completo e incompleto. Primera inmunización y recuerdos.

8 Anticuerpos policlonales
Inmunización del conejo Recuerdos Extracción de sangre Preparación del suero Purificación del anticuerpo (métodos opcionales) Caracterización del antisuero

9 Anticuerpos policlonales

10 Anticuerpos monoclonales
Inmunización del ratón Extracción del bazo Preparación de hibridomas (mieloma+B) Selección de los clones Producción y uso de anticuerpos

11 Elección del tipo de anticuerpo

12 Marcaje de Anticuerpos

13 Marcaje de Anticuerpos para uso en Células

14 Immunoblotting (western blot) Immunoblotting (western blot)

15 Inmunocitoquímica Las flechas indican la presencia de neuronas con hormona liberadora de la hormona del crecimiento en el Núcleo Arcuato (cerebro) de rata de 4 meses.

16 Inmunocitoquímica Localización de la “calbinding” (calbindina) en cerebelo de rata

17 Microscopia (confocal e inmunofluorescencia)

18 Inmunoprecipitación

19 Inmunoprecipitación

20 ELISA

21 ELISA

22 Cromatografía de inmunoafinidad

23 Oro Coloidal Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm) en células endoteliales. La barra corresponde a 0,25 mM.

24 Oro Coloidal Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm). G: aparato de Golgi; Lu: lumen vascularLa barra corresponde a 0,25 mM.