M. en B. Edgar Sandoval Petris Hermosillo Sonora, Ciclo Escolar 2012-2 UNIDAD 3: La microscopía M. en B. Edgar Sandoval Petris Hermosillo Sonora, Ciclo Escolar 2012-2

Objetivos de la Unidad El alumno será capaz de distinguir los componentes y el funcionamiento del microscopio El alumno será capaz de relatar la utilización de distintos tipos de microscopios El alumno será capaz de argumentar la importancia de la microscopia como herramienta fundamental de la Biología Celular

Distintos tamaños de células

Submúltiplos del metro: Decímetro (dm): 10-1 metros. Centímetro (cm): 10-2 metros. Milímetro (mm): 10-3 metros. Micrómetro (µm): 10-6 metros. Nanómetro (nm): 10-9 metros. Angstrom (Å): 10-10 metros. Picómetro (pm): 10-12 metros. Femtómetro o fermi (fm): 10-15 metros. Attómetro (am): 10-18 metros. Zeptómetro (zm): 10-21 metros. Yoctómetro (ym): 10-24 metros

Historia del Microscopio Zacharias Janssen (1590) ó Galileo Galilei (1610). William Harvey (1665) observó al microscopio los capilares sanguíneos. Robert Hooke publica su obra Micrographia (observó corcho).

Partes del Microscopio fuente de luz http://www.youtube.com/watch?v=IqIUnEuyX1E&feature=plcp

Fundamento del Microscopio

Tipo de tinciones Tinciones generales. Aquellas que usan sustancias coloreadas que se unen a componentes tisulares por afinidad química. Histoquímica. Son aquellas técnicas de tinción que implican la modificación química de algunas moléculas tisulares para posteriormente ponerlas de manifiesto con colorantes. c) Lectinas. Las lectinas son dominios de proteínas, como las selectinas, que son capaces de reconocer glúcidos que forman parte de polisacáridos. Tienen una gran especificidad y se usan para determinar el tipo de glúcido que aparece en las glucoproteínas de la membrana plasmática o de la matriz extracelular de los diferentes tejidos.

d) Inmunocitoquímica. Son técnicas histológicas muy potentes basadas en la alta especificidad de unión de los anticuerpos a los antígenos contra los que se produjeron. e) Hibridación. Son técnicas basadas en la unión complementaria de las bases de ácidos nucleicos (adenina con la timina, o con el uracilo, y de la guanina con al citosina). Esto hace que dos cadenas complementarias de ácidos nucleicos se unan entre sí de forma muy específica, es decir, hibriden. Siguiendo este principio se pueden sintetizar sondas marcadas, cadenas de ADN o ARN con una secuencia de bases determinada que llevan una molécula unida para poder detectarlas. La secuencia de bases de la sonda es complementaria a otra que está presente en la célula, normalmente en forma de ARNm. Con ello podemos observar qué células expresan un determinado gen.

Tinciones generales Las tinciones generales están basadas en el uso de colorantes, sustancias mediante las cuales se consigue colorear a los tejidos. Los colorantes son normalmente hidrosolubles y se caracterizan por unirse a ciertas moléculas presentes en los tejidos gracias a afinidades químicas. Se utilizan normalmente para teñir a las células y componentes tisulares que van a ser observados con el microscopio óptico. Los colorantes son los elementos principales de las tinciones generales. Son moléculas que poseen tres componentes importantes: un esqueleto incoloro, que normalmente es un anillo aromático de benceno, al cual se le unen dos tipos de radicales: uno que aporta el color, denominado cromóforo, y otro que posibilita la unión a elementos del tejido denominado auxocromo. Al conjunto de estos tres elementos unidos en una molécula se denomina cromógeno.

Según la naturaleza química del cromóforo hay varios tipos de colorantes: nitrosos, ozoicos, derivados de la antroquinona, derivados de la acridina, derivados de iminas quinónicas, derivados de diferrilmetano y triferrilmetano, derviados del xanteno y derivados de las talocianinas. Según la naturaleza química del radical auxocromo los colorantes se clasifican en: Básicos: son sales en las que la base aporta el color, mientras que la parte ácida es incolora. Tienen apetencia por sustancias ácidas del tejido como el ADN o ciertos componentes de la matriz extracelular como los glucosaminoglucanos. Así, ponen de manifiesto el núcleo y el ARN, sobre todo el ARNr presente en los ribosomas por ser muy abundante, así como ciertas matrices extracelulares ricas en componentes ácidos. Ejemplos de colorantes básicos son la tionina, safranina, azul de toluidina, el azul de metileno o la hematoxilina.

Ácidos: son sales con el anión coloreado y la base incolora Ácidos: son sales con el anión coloreado y la base incolora. Tienen apetencia por sustancias básicas, sobre todo estructuras proteicas localizadas en el citoplasma celular y también el colágeno de la matriz extracelular. Ejemplos de colorantes ácidos son la fucsina ácida, verde rápido, naranja G o la eosina. Neutros: poseen una porción ácida y otra básica, ambas con capacidad para aportar color. Por tanto un mismo colorante puede teñir tanto las partes básicas como las ácidas de los tejidos. Por ejemplo, el eosinato de azul de metileno. Indiferentes: realmente no se unen a elementos de los tejidos por afinidad química sino porque se disuelven en ellos. Por ejemplo, el colorante sudán se disuelve en los lípidos y por tanto teñirá a las gotas de lípidos, especialmente en los adipocitos.

Cryptosporidium en traquea de pollo (Hematoxilina-Eosina)

Células de la sangre

Células en la orina

Exposiciones Preparación de muestras, partes, fundamento y fotos (uso) Microscopio de fluorescencia Microscopio confocal Microscopio de contraste de fases Microscopia con video y procesamiento de imágenes Microscopio electrónico de barrido Microscopio electrónico de transmisión http://www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/MONOWEB/inicio.htm http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/1-introduccion.php