Recombinación Recombinación homóloga Recombinación sitio-específico
Cómo se inicia la Recombinación?
Enzimas involucradas en la generación de la cadena sencilla con el extremo 3´OH libre sitio chi 5´GCTGGTGG3´ 3´CGACCACC5´ RecBCD helicasa y nucleasa que forman el sustrato para RecA
Filamento de Rec A
Rec A
Resolución de las uniones Holliday Ruv A se une a las cuatro hebras del intermediario de Holliday Ruv B es hexámero con actividad de ATPasa que sirve de motor para su movimiento. El consumo de ATP permite girar a la molécula Ruv C es una endonucleasa que resuelve los intermediarios de Holliday En eucariontes no se han encontrado homólogos para las proteínas Ruv, pero sí para la Rec A
Reparación del ADN Enfermedades humanas asociadas a problemas en los mecanismos de reparación
Depurinación y desaminación de bases 5000 al día 100 al día
La naturaleza de las bases permite detectar mejor el daño
Citocinas metiladas al desaminarse producen timina
Dímeros de timina Exposición a radiaciones ultravioleta
Mutaciones que pueden producir los errores en el ADN
MECANISMOS DE REPARACION 1- Fotoreactivación (ruptura de los dímeros de pirimidinas por acción de una fotoliasa (phr) activada mediante luz visible). 2- Escisión + reparación * Reparación de nucleotidos aislados por lesión u.v: necesita la otra hebra como templado (hasta 30 bp) Intervienen las endonucleasas uvrA,B,C y la helicasa uvrD * Reparación de bases modificadas (sitiosAP, alquilación o metilación) 3- Reparación post- replicativa * Reparación del apareamiento (“mismatch”): una metilasa reconoce DNA recientemente replicado (dam) e intervienen las proteínas “mut” (helicasas, etc) * Reparación por recombinacion
Acción de la fotoliasa
Reparación por escisión de bases
Reparación por escisión de nucleótidos uvrABC (excinucleasa)
Mecanismos de reparación del ADN
Reparación por escisión en bacterias y en humanos
Mecanismos de reparación cuando las dos cadenas se dañan
Reparación por recombinación
Reparación post-replicativa
Cómo distinguir la cadena molde cuando se repara un error?
Respuesta SOS
RecA está involucrada en activar la respuesta SOS
La recombinación puede involucrar la formación de heteroduplex o de recombinantes
Actividades de RecA