Pneumocistosis y Microsporidiosis Joselyn Bahamonde B. Brisa Hualla G. Carrera de Tecnología Médica

Neumocistosis

Pneumocistosis Generalidades Pneumocystis carinii microorganismo unicelular eucariota de baja virulencia, presente en pulmones de los seres humanos y una variedad de animales, y que se presenta como un patógeno oportunista extracelular. Descubierta por Carlos Chagas en 1909. De taxonomia incierta fue clasificada como un protozoario, evidencias recientes sugieren que se encuentra filogenéticamente relacionada con los hongos.

Ciclo evolutivo

generalidades Protozoario Hongo Se consigue en todos los textos de parasitología . , la susceptibilidad frente a los antibióticos, la falta de crecimiento en terrenos para hongos y su morfología general, especialmente la carencia de ergosterol en su membrana citoplasmática, lo vuelven insensible frente a los antifúngicos. Hongo Con dificultad o no se le consigue en los de micologia. Tiene un factor proteico de elongación de translación de un gen exclusivo para hongos. La coloración que toma su pared celular por el componente beta-1, 3-glucano (con methenamina de plata )que es común para levaduras . reacciones cruzadas de P. Carinii con anticuerpos monoclonales contra Aspergillus sp

Pneumocystis carinii Generalidades Se piensa que la puerta de entrada para P. carinii es el tracto respiratorio, ya que la infección primaria ocurre en el pulmón, aunque puede comprometer cualquier tejido en especial los ricos en reticulocitos. Las condiciones clínicas más importantes que predisponen a la neumonía por este microorganismo se encuentran los recién nacidos prematuros y la malnutrición, la terapia citotóxica, el tratamiento con corticosteroides, tumores sólidos, enfermedades hematopoyéticas malignas, defectos en las inmunoglobulinas y VIH/SIDA, entre otras.

Sintomas mas frecuentes: Depende del tipo y de la severidad de la inmunosupresion, del compromiso respiratorio y clinico. Tos seca no productiva Fiebre de intensidad variable Disnea de carácter progresivo Cianosis Baja de peso Dolor toraxico Espectoraciones

Sintomatología Pacientes hematooncológicos presentan neumonia. Portadores de Sida pueden llegar a la insuficiencia respiratoria. Se estudia su asociación con Síndrome de Muerte Súbita.

Pneumocystis carinii Un infectado con VIH esta en riesgo de Neumocistosis cuando el nivel de linfocitos CD4 es de 200 cel/mm3 o menos. necesidad de poseer personal bien entrenado en el manejo cuidadoso de las muestras y en la realización de las técnicas, aparte de poseer el equipo adecuado de laboratorio.

Diagnóstico Es importante el tipo de muestra ya que la positividad de estos examenes varían ampliamente según el tipo de muestra a examinar. Lo más común son las de expectoraciones, donde lo ideal seria muestras seriadas. Expectoración espontánea Expectoración asistida El lavado broncoalveolar Biopsia transbronquial Biopsia a cielo abierto Aspirado faringotraqueal

diagnostico Los métodos de cultivos y pruebas serologías no son prácticas. el diagnóstico de la neumonía por P. carinii depende de la identificación morfológica del microorganismo. Se han identificado tres estadíos de desarrollo en el ciclo vital de P. carinii: El trofozoito El quiste El prequiste

diagnóstico se ha observado que las distintas tinciones tienen variaciones en la sensibilidad y en cuanto a la afinidad tintorial por las estructuras detectadas y el tiempo de realización de la técnica. Las técnicas que usan anticuerpos monoclonales son más sensibles que las tinciones histológicas. La inmunofluorescencia ha sido la técnica inmunológica más ampliamente usada para el diagnóstico de P. carinii.

técnica de la inmunofluorescencia directa (IFD) Es relativamente costosa, es de fácil y rápida realización con un tiempo estimado de 3 horas. No es necesario excluir a los pacientes con tratamiento profiláctico, pero se debe evaluar el tiempo de duración de la terapia y correlacionarlo con el diagnóstico.

Técnica de coloración histológica de Gomori-Grocott (G-G) es una técnica muy larga ( tiempo estimado: 24 horas) y laboriosa. La relación costo/ beneficio no es acorde con la necesidad y rápidez que requiere para su diagnóstico en pacientes con SIDA. Su positividad que presenta es cercana al 90% 

diagnóstico En esta técnica se debe considerar a elementos como hematíes, núcleos desnudos y detritus celulares, y a otros agentes infecciosos como hongos levaduriformes, ademas de elementos parasitarios como esporas de Nosema sp.  

diagnóstico casos IFD G-G 1 + 9 - 2 18 De las técnicas antes mencionadas podemos decir, que de acuerdo a estudios realizados la de IFD es la prueba mas idónea para diagnosticar P.carinii en muestras de esputo, donde los resultados obtenidos de 30 pacientes inmunocomprometidos con tratamiento profiláctico fueron los siguientes: casos IFD G-G 1 + 9 - 2 18

diagnóstico De esto se puede destacar que el hecho de recibir tratamiento profiláctico no impide el hallazgo del microorganismo, pero no se sabe si afecta el tiempo de duración de la misma.

Gram- Weigert

Tinción de Giemsa

Técnica de PCR El pneumocystis carinni tiene cuatros regiones genómicas variables que son: 1)     transcriptor interno espaciador numero 1 del gen operon nuclear del rRNA . 2)     el intron del gen nuclear 26S rRNA . 3)     la región variable del gen mitocondrial 26S rRNA. 4)     La región del intron numero 6 del gen de la beta-tubulina.  

Técnica de PCR Los tipos de Pneumocystis carinni están definidos por una combinación de los cuatro alelos correspondientes a las cuatro regiones genómicas antes mencionadas. La desventaja que tiene esta técnica es que aquellos que contengan mas de dos tipos de Pneumocystis carinii, no podrán ser tipificados por la complejidad de la configuración de sus alelos.

Microsporidiosis

Microsporidiosis Generalidades Los microsporidios han surgido en los últimos años como agentes oportunistas muy importantes en el paciente inmunocomprometido, principalmente en pacientes con SIDA La entidad de seres diferenciados del resto de Protozoos se debe a Baldini en 1882 Pertenecen al Phylum Microspora ,son parásitos intracelulares obligados de hospederos vertebrados e invertebrados Parasitan casi todos los tejidos y órganos del hospedero, la mayoría infecta el tracto digestivo y/o órganos relacionados, pero también se les ha encontrado en el sistema reproductor, excretor, nervioso, tejido conectivo y músculo verdaderos eucariontes porque tienen un núcleo con membrana envolvente y membranas intra citoplasmáticas ordenadas pero la configuración nuclear es diferente entre los géneros de microsporidios Estudios recientes sugieren que los microsporidios semejan Procariotes en muchos aspectos, no poseen mitocondrias, peroxisomas, membranas de Golgi ni otras estructuras típicas de Eucariontes ·        Se caracterizan por formar resistentes esporas que presentan en su interior una estructura denominada tubo o filamento polar, a través de la cual infectan las células susceptibles donde desarrollan su ciclo vital Esporoplasma es la forma infectante del parásito.

generalidades •verdaderos eucariontes : tienen un núcleo con membrana envolvente y membranas intra citoplasmáticas ordenadas la configuración nuclear es diferente entre los géneros de microsporidios semejan Procariotes en muchos aspectos, no poseen mitocondrias, peroxisomas, membranas de Golgi ni otras estructuras típicas de Eucariontes

GENERALIDADES Se caracterizan por formar resistentes esporas que presentan en su interior una estructura :tubo o filamento polar INFECTANDO LAS CELULAS SUSEPTIBLES DONDE DESARROLLAN SU CICLO

Principales Microsporidios que infectan al hombre Genero Encephalitozoon Enterocytozoon Nosema Pleistophora Septata Especie E.cuniculi, E.hellem E.bieneusi N.corneum P.sp S.intestinalis

Epidemiología se le considera de distribución cosmopolita, por el aumento de casos reportados. A partir del primer informe de infección intestinal por microsporidios en 1985 las especies E.bieneusi y E.intestinalis han ganado una gran importancia como causa de Diarrea persistente en pacientes con SIDA , recuento de linfocitos CD4 entre 50-100 /mm3 o menos. En Chile, 15 de 38 pacientes con SIDA y diarrea crónica, se pesquisaron microsporidios en sus heces (39.5%) Aunque no esta bien definido la causa de diarrea persistente en los pacientes con VIH+ la mas probable para su transmisión, debido a la alta prevalencia es E.bieneusi y E.intestinalis

sintomatología infecciones intestinales y generalizada Mas frecuente en pacientes con SIDA y diarrea crónica Perdida de peso Síndrome de mala absorción Diarrea persistente

sintomatología Infecciones oculares compromiso de la cornea y de la conjuntiva con inflamación conjuntival y queratitis. Infecciones del hígado de la vía biliar

Diagnóstico muestras materia fecal, aspirado duodenal, fluído broncoalveolar, orina entre otras se hace difícil por : tamaño muy pequeño 1-2um, su forma de la espora que la hace fácilmente confundible con hongos distribución empalizadas por esto pueden diagnosticarse como bacterias,hongos y ooquistes de coccidios .Además poseen propiedades de coloración variable y producen una respuesta inflamatoria en el hospedero. Los coproparasitologicos seriados convencionales son leídos como negativos y no aportan ninguna información que sirva para sospechar de su presencia, a menos que presente: manifestaciones clínicas diarrea prolongada, VIH (+), coprológico hecho con coloraciones especiales para Cryptosporidium spp,. Negativo.

Microscopia electrónica ·        Permite dilucidar los elementos taxonómicos, tamaño y aspecto de las esporas numero de volutas del tubo polar , numero de núcleos, etc. biopsia y tejidointestinal. ·        Inconveniente: invasivo, personal muy entrenado, de alta tecnología y altos costos.

Microscopia electrónica

Técnicas de coloración, tricrómica modificada por Weber quick-hot gram-chromotropo Su sensibilidad y especificidad son ligeramente superiores 88% que las técnicas anteriormente relacionadas. prueba rápida, sencilla desde el punto de vista técnico y económica

Microscopia de fluorescencia El diagnóstico general de microsporidiosis se hace por medio del microscopio de luz o fluorescencia, a través de las técnicas mencionadas con anterioridad. Con estas técnicas no es posible realizar la diferenciación de especie, E. bieneusi o E.intestinalis, indispensable para el adecuado manejo y tratamiento de los pacientes con diarrea persistente.

Cultivo celular Dentro del género Encephalitozoon, otras dos especies (E. hellem y E. cuniculi) causan infecciones generalmente diseminadas provocando conjuntivitis, sinusitis y afectación de los aparatos respiratorio y genitourinario. Estudio: se identifico la especie hellem del género Encephalitozoon aislado en cultivo celular a partir del lavado broncoalveolar (LBA) de un paciente con SIDA, ingresado en el hospital La Fe de Valencia (España). El parásito fue aislado en 19 ocasiones y diferentes líneas celulares, células de epitelio renal de mono (Vero-E6), de perro, de conejo fibroblastos fetales humanos o bovinos

Cultivo celular Resultado La identificación del género se realizó, , mediante microscopía electrónica semejanza morfológica entre E. hellem y E. Cuniculi E. hellem fue identificado mediante IF, WB y PCR mostraron inequívocamente, que el microsporidio aislado pertenece a la especie E. hellem. El aislado ha sido denominado EHVS-96 (Encephalitozoon hellem, Valencia, Spain-1996) y se mantiene en cultivo desde abril de 1996.  

Técnica de PCR Amplifica segmentos de ácidos nucleicos con secuencias específicas que reconocen de manera exclusiva cada una de las especies microsporidio intestinales Técnica rápida, sensible y especifica comparada con las técnicas inmunofluorescentes