“Variables Pre –Analíticas  y Aspectos de seguridad en el Laboratorio de Citología “ Aura Falla Field Marketing Manager – BioM & Microscopy

Tinción Papanicolaou – Tinción PAP 1917 - Estudios hormonales 1943 - Investigaciones en cáncer de cuello uterino

Criterios de Malignidad Características celulares a ser evaluadas Características nucleares a ser evaluadas Número de células Tamaño y variaciones de tamaño Relación núcleo /citoplasma Su distribución Posición Si estan aisladas Número Si están agregadas Patrones de cromatina Modificaciones superficie Hipercromasia Tamaño y forma Cromocentros Apariencia citoplásmatica Número de nuecléolos, tamaño y forma Tinción del citoplasma Mitosis Productos de adpatación functional Necrosis Cuerpos de Inclusión

Citodiagnóstico y Tinción PAP OBJETIVO : “ El éxito y la eficacia de la detección cervical, se mide por su capacidad para detectar casos pre-cancerosos (sensibilidad) y evitar, al mismo tiempo, los diagnósticos falsos positivos (especificidad) ”

Tinción PAP – Variables pre y post- analíticas Componentes importante en el proceso de operaciones de un laboratorio, porque existe una diversidad de variables que afectan a un resultado .

Tinción PAP – Control de Calidad (CC) El control de calidad es un conjunto de acciones aplicadas en la ejecución de una prueba para asegurar que los resultados, productos o servicios puedan ser entregados. Involucra: Verificación de la adecuada técnica de muestreo Verificación de la adecuada técnica de procesamiento Verificación de una correcta lectura con base en procesos diseñados para identificar y corregir deficiencias Implementar un buen CC permite garantizar la REPRODUCIBILIDAD y la VALIDEZ de las interpretaciones en citología Riesgo Vital : FALSOS NEGATIVOS (sub diagnóstico)

Falsos Negativos : Sub diagnóstico Los dos mayores componentes del % de falsos negativos son: Error en la toma de muestra : las células anormales no se recolectan o no son transferidas a la lámina Error de detección : Las células anormales se omiten durante la observación microscópica o se interpretan de manera equivocada. IMPORTANTE : Diversos estudios estiman que los 2/3 de falsos negativos se atribuyen a una mala toma de muestra y 1/3 a errores de interpretación. Tasas de FN : Estimación entre el 5% al 30% (según la Agency for Health Care Policy and Research - USA)

Factores que influyen en los FN en citología

Factores que influyen en la sensibilidad de la citología de cuello uterino

La Fase PRE ANALÍTICA en el Lab. de Citología Comprende: La Toma y Remisión de la muestra al laboratorio de citología 2. Recepción de la muestra por parte del laboratorio Recomendaciones : Explicar el procedimiento a la paciente Llenar la solicitud con la filiación del paciente y rotular la lámina En presencia de flujo vaginal, hacer una limpieza cuidadosa previa con torunda, gasa o un aplicador humedecida con solución salina. Evaluar presencia de lesiones en vagina y vulva. No realizar tacto vaginal antes de la toma de muestra.

La Fase POST ANALÍTICA en el Lab. de Citología Comprende: 1. Proceso de coloración (manual o automática) 2. Proceso de lectura e interpretación cito morfológica 3. Proceso de reporte y archivo de resultados

La Fijación como variable pre analítica : Comenzando bien! La Fijación pulverizable es la más usada actualmente. Lacas comunes pueden contener hidrocarbonos clorinados o fluorados. Los fijadores basados en PEG en solución alcohólica han demostrado ser los fijadores más óptimos Film protector : Excelente preservación y rápida fijación Evitar la desecación y contracción celular! 16/05/2002

Proceso de Fijación : comenzando bien! Procedimiento M Fix: Se colocan las muestras sobre un papel filtro y se dispara el spray a unos 15 a 20 cm con un ángulo de 45°C. Aplicar el spray 3 veces (0.3 a 0.6 ml.). Seca en 10’. Rinde aprox. 250 aplicaciones Se retira solo con agua IMPORTANTE : No se requiere alcoholes descendentes para retirarlo, solo agua y luego el 1er. Colorante. Errores más comunes: Recolección inapropiada Transferencia deficiente desde el dispositivo a la lámina. Secado al aire sin fijación previa. Contaminación con talco de los guantes o lubricante

Otro proceso de Fijación : comenzando bien! Errores más comunes: Recolección inapropiada Transferencia deficiente desde el dispositivo a la lámina. Secado al aire sin fijación previa. Contaminación con talco de los guantes o lubricante 1. Etanol absoluto al 96% 2. Etanol desnaturalizado con Metil etil cetona al 1% Preservación de las estructuras finas del material celular por 30 minutos * Metil etil cetona : desnaturaliza el alcohol y aumenta su poder de deshidratatción, es neutral en la reacción de fijación

La Fijación con PEG + Alcohol : comenzando bien! Antes :Merckofix® Ahora : M Fix ® Costo . S/ 0.12 / prueba

Estandarizando el proceso de coloración : RtU Hematoxilina Orange G + hematoxilina Hematoxilina + EA 50 Eosina Y Ligth Green Hematoxilina a Hemateína Orange G Vesuvina

Tinciones Lista para USO o RtU (Ready to Use) Hematoxilina + EA 50 (mezcla polícroma) Hematoxilina Orange G + hematoxilina EA 31 EA 50 EA 65 Hematoxilina de Harris (5 g) Hematoxilina de Mayer Hematoxilina de Gill II (2 g) Importante : Disponibilidad del colorante oxidado (hemateína) durante la vida media del colorante. Quelación de la hemateína con los iones metálicos trivalentes

Tinciones Lista para USO o RtU (Ready to Use) xx/xx/xxxx Tinciones Lista para USO o RtU (Ready to Use) Eosin Y tiñe más fuertemente células maduras escamosas, núcleos y cilias, mientras que el Ligth green tiñe células metabólicamente activas: Células superficiales rosadas con Eosin Y, las parabasales e intermedias tiñen verde o azul-verdosas con el Light green. Reacción tintorial 3a - EA 31 3b - EA 50 Ciánofilo (basofilico) citoplasma Verde intenso Azul-verdoso Eosinófilo (acidofílico) citoplasma Rosado Eritrocitos Rojo Citoplasma queratinizado Rosado a Naranja Núcleos celulares Azul, violeta oscuro, marrón Mircroorganismos Gris-azules Tricomonas Gris-verdes Editor: Presentation name herePresentation title in footer | 00 Month 0000 Editor: Presentation name here

Citología y Aspectos de Bioseguridad EL PROVEEDOR DEBE AYUDAR AL USUARIO A IDENTIFICAR LOS RIESGOS y A TOMAR CONCIENCIA DE ELLOS CHEQUEAR LAS SUSTANCIAS EN LA WEB DEFINIR LOS RIESGOS EVALUAR LA EXPOSICIÓN A LOS RIESGOS 1 2

Citología y Aspectos de Bioseguridad 1. Sea que el laboratorio de citología prepare los colorantes o use soluciones lista para uso, debe manejar las FDS : Fichas de Datos de Seguridad como parte de las buenas prácticas en el laboratorio. Las FDS reportan información muy importante sobre el manejo de los reactivos químicos y colorantes usados como ingredientes en citología. Las soluciones de colorantes listos para uso, reducen el riesgo de exposición y el manejo de reactivos químicos. Las hojas FDS nos indican las barreras de protección que debemos usar al manipular los reactivos químicos y colorantes usados en el Lab de Citología Regulaciones locales existentes (SUNAT) y consciencia en aspectos de bioseguridad son tendencias que estan llevando al uso de sustitutos del xileno (xilol) 15/04/2017

Citología y Aspectos de Bioseguridad Modificaciones en la formulación de la Hematoxilina: 1. En los colorantes listo para uso, se reemplazó el agente oxidante ,Cloruro de mercurio, por el Yodato de sodio (370 mg) debido a su toxicidad. No altera la vida útil del colorante y produce idénticos resultados de tinción nuclear. 2. Las soluciones de Gill , no muy frecuente usadas, son las más respetuosas con el medio ambiente. Todas contienen Yodato de sodio y no requieren ser filtradas. Recomendaciones de Almacenamiento de los reactivos de uso en citología Los colorantes listo para uso, son altamente inflamables, tal como lo indica sus FDS (Ficha de datos de Seguridad). Debe organizarse el almacén de manera adecuada. Las mismas condiciones de almacenamiento, rigen para M Fix. . Inflamables 15/04/2017

La característica mas notable de GHS - AHORA Nuevos pictogramas y cambio en el etiquetado Peligros Físicos Explosivos Inflamables Oxidantes Gas presurizado Corrosivos Peligros ambientales Peligros de Salud Advertencia Irritante Peligro Corrosivos Peligro por aspiracion Peligroso MA

Hojas de Datos de Seguridad (SDS o FDS) Consideraciones Generales

Citología y Aspectos de Seguridad Modificaciones en el uso de aclarantes : El xileno posee más riesgos a la exposición continua que un sustituto del mismo. La FDS (Ficha de Seguridad) del Xileno o Xilol, debe ser leida por todo el personal del laboratorio de citología y tomar consciencia de los riesgos y el control de los mismos. . Advertencia Irritante Inflamable 15/04/2017

Citología y Aspectos de Bioseguridad Modificaciones en el uso de aclarantes : Los susititutos son compuestos hidrocarburos menos tóxicos por ser compuestos orgánicos de cadena abierta (alifática). Los sustitutos del xileno nos conducen a realizar procesos de deshidratación más limpios y el uso de alcoholes absoiultos de grado apropiado por ser algo más oleosos. . 15/04/2017

Citología y Aspectos de Bioseguridad La opción de uso de un Sustituto del Xilol Mezcla de hidrocarbonos alifáticos C9-C11. Ahora con tasa de evaporación mas alta. Muestras a aplicar :Tejido fijado, secciones de parafina , muestras citológicas.  Mayor capacidad para disolver la parafina, >6 gr de parafina en 150 ml de solvente Menos olor que el xileno, no cancerígeno, no tiene impacto en el medio ambiente. Su uso no afecta las metodologías convencionales. Muy bajo contenido de sustancias aromática (rango ppm ) Necesita un Medio de montaje especial. No Descarte como residuo especial. 15/04/2017

Neoclear : Indicaciones de Uso

Citología y Bioseguridad Neo-Clear®, Cat. No. 1.098435000 (Sustituto del Xilol) Consideraciones especiales al trabajar con Neoclear : Dado que Neoclear tiene una tasa de evaporación más baja que el Xilol , el exceso de Neoclear debe ser retirado (adsorbiéndolo con ayuda de una hoja de papel toalla o filtro por 1’ o 2’), luego se procede con el montaje normal con Neomount. Esperar 30’ para el secado. La turbidez de los baños de alcohol no ocurre si la calidad del mismo es “extra puro” o de 96° a más. Dado que el Neoclear es un derivado de las isoparafinas, tiene una consistencia ligeramente aceitosa, por lo que los alcoholes de grado técnico, podrían no ser efectivos en el proceso de deshidratación 15/04/2017

Histología – Montaje especial Neo-Mount®, Cat. No. 109016.0500 Agente de montaje basado en la formulación de Neo-Clear® Las mejores propiedades ópticas Tiempo de secado aproximado: 30 min Comparable con el medio de montaje basado en xyleno. Resultado brillantey aclaramiento ideal por compatibilidad química Los medios de montaje basados en Xylol darán montajes nublados con Neo-Clear®. LS&A PM SPA, Ute Schmidt 15/04/2017

Neoclear : Aplicación en Citología Página 34

Productos para Citología : Soluciones Ready to Use Alta reproducibilidad, estabilidad lote a lote Coloraciones brillantes y de alta calidad,resultados estables. Fácil manipuleo. Tiempo de trabajo y esfuerzo son reducidos. Alta capacidad de las soluciones preparadas para maximizar ya sea el número de muestras procesadas y la economía del laboratorio. Larga viabilidad de las soluciones Seguridad química en el laboratorio de citología. 16/05/2002

Células Normales Células Anormales

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