TECNICAS INMUNOLÓGICAS CELULARES Prof. Caroline Weinstein

AISLAMIENTO DE LINFOCITOS

AISLAMIENTO DE LINFOCITOS

ENSAYO INCORPORACIÓN TIMIDINA TRITIADA (FUNCIONAL) INCORPORACIÓN DE TIMIDINA TRITIADA

ENSAYO DE CITOTOXICIDAD (FUNCIONALIDAD)

ENSAYO MTT:

ALTERNATIVAS AL ENSAYO DE INCORPORACIÓN DE TIMIDINA TRITIADA:

CITOMETRIA DE FLUJO: UNA POTENTE HERRAMIENTA EN INMUNOLOGÍA

Immunophenotyping .1 1 10 100 1000 Log FITC

CD4/CD8 Quadstats Log FITC Fluorescence (CD8) 45% 2% 27% 26% 1 2 3 4 .1 1 10 100 1000 Log FITC Fluorescence (CD8)

Otras aplicaciones citometria de flujo Evaluación funcional de la capacidad oxidasas (NADPH dependiente) de los neutrófilos neutrófilo dihidrorodamina DIHIDRORODAMINA OXIDADA PMA

  Control- Unstim(Top), Stimulated(Bottom) Twin #1 (AD)Unstim(Top), Stimulated(Bottom) Twin #2 (JD)Unstim(Top), Stimulated(Bottom)                                                                Neutrophil oxidative index (NOI) = 1,614                           NOI=1                              NOI=2 

HEMOGLOBINURIA PAROXÍSTICA NOCTURNA CD59 CD55 Healthy  Control                                                                      Patient

PROLIFERACIÓN DE LINFOCITOS POR CITOMETRÍA DE FLUJO:

Ejemplo: inmunohistoquímica para HER-2

SEPARACIÓN MAGNÉTICA DE CÉLULAS

EJERCICIOS: La figura anterior representa un resultado de un ensayo de citotoxicidad para linfocitos CD8. Al respecto explique: Fundamento del método. Identifique que curva representa una menor actividad citotóxica

EJERCICIOS: Dibuje una nube de puntos en el siguiente gráfico que represente los resultados de citometría de flujo de un paciente que no posee linfocitos CD8 CD8 CD4

EJERCICIOS: Con respecto a la prueba de incorporación de timidina tritiada: Explique el fundamento del método b. Métodos alternativos. c. Cómo espera encontrarla en un individuo cuyo informe de citometría de flujo es el siguiente. Fundamente su respuesta. CD8 CD4

EJERCICIOS: Un científico japonés sostiene que el cáncer se produce por una inmunodepresión. Describa un ensayo que le permita detectar una respuesta inmune deprimida ante tumores.

EJERCICIOS: Usted ha sido contratado para ser el jefe del laboratorio de seguimiento de pacientes HIV positivos. Debe implementar una técnica para analizar las subpoblaciones linfocitarias. Describa la técnica escogida, haciendo un análisis crítico (ventajas y desventajas)