GENERO Y ESPECIE MICROORGANISMOS CLINICAMENTE IMPORTANTES TRABAJO EN GRUPO

TERMINOS TAXONÓMICOS Familia: un grupo de géneros relacionados . Género: un grupo de las especies relacionadas. Especie: un grupo de cepas relacionadas Tipo: los grupos de cepas dentro de las especies (por ejemplo. biotipos, serotipos) Cepa: aislamiento de una especie en particular.

ESCRITURA El término más comúnmente utilizado, es el nombre de las especies (por ejemplo. Streptococcus pyogenes  - abreviatura S. pyogenes). Hay siempre dos partes del nombre de la especie, uno definirá el género en este caso "Streptococcus" y la otra parte definirá la especie (en este caso "pyogenes"). El nombre del género siempre se escribe con mayúscula y el nombre de la especie no. Ambos, la especie y el género se subrayan o se escriben en itálicas.

PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN 1. Pruebas bioquímicas 2. Crecimiento bajo condiciones ambientales como aerobiosis, anaerobiosis. 3. Pruebas de tolerancia o habilidad para crecer en presencia de ciertos componentes en el medio de cultivo 4. Pruebas de identificación serológica

PRUEBAS BIOQUIMICAS DEFINICIÓN: Evalúan la capacidad metabólica de un microorganismo relacionado con: Sustratos que utiliza la bacteria para crecer como DNA, hidratos de carbono, aminoacidos Enzimas que posee la bacteria como decarboxilasa, ureasa, peroxidasa Productos metabólicos producidos por las bacterias como ácido fórmico, succínico, butírico. La capacidad de reducir ciertos iones como ferroso a férrico

PRUEBAS BIOQUIMICAS La presencia o ausencia de estructuras propias como flagelos – motilidad. La producción o no de hemolisinas. El requerimiento o no de ciertos factores especiales para el crecimiento bacteriano como proteinas séricas La producción o no de algunas tóxinas con capacidad virulenta como la difteria , botulismo.

PRUEBAS DE TOLERANCIA DEFINICIÓN: Pueden referirse a cambios extremos de temperatura óptima de crecimiento, de Ph, de sales presentes en el medio como NaCl, de ciertos antibióticos adicionales como concentraciones conocidas de Kanamicina, Gentamicina Bacitracina, etc.

PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN DEFINICIÓN: Son serológicas y determinan la presencia de antígenos específicos en la bacteria, que se manifiestan al ponerse al contacto con antisueros específicos, producidos en animales de laboratorio. Existen diversas formas de evaluar la presencia de un antígeno determinado: Precipitación Aglutinación Fijación de complemento Inmuno fluorescencia

ESQUEMAS DE IDENTIFICACION 1. Crecimiento sobre medios primarios 2. Formación de colonias 3. Caracteristicas morfológicas

MICROORGANISMOS GRAM – POSITIVOS Staphylococos Streptococos Cocos Bacilos Corynebacterium Listeria

MICROORGANISMOS GRAM – NEGATIVOS Cocos Bacilos y cocobacilos Formas espirales Neisseria patógena Haemophilus Bordetella Brucella Gardnerella Campylobacter

MICROORGANISMOS GRAM – NEGATIVOS NO EXIGENTES Enterobacterias No fermentadores Pseudomonas Bacilos

MICROORGANISMOS ANAEROBIOS ESTRICTOS Gram positivos Gram negativos Cocos Bacilos Cocos Bacilos

PRUEBAS BIOQUIMICAS 1) Enzimas vinculadas con la respiración     a) oxidasa      b) catalasa   2) Descomposición de azúcares simples, ácidos orgánicos y  otros 2.1) Requerimientos de oxígeno   a) OF (óxido-fermentación)    b) Crecimiento en caldo tioglicolato

PRUEBAS BIOQUIMICAS 2.2) Producción de ácido, o ácido y gas   a) Fermentación de carbohidratos    2.3) Detección de enzimas y vías metabólicas a) RM-VP (rojo de metilo - Voges Proskauer) 3) Fuente única de carbono a) Citrato

PRUEBAS BIOQUIMICAS 4.1) Reducción de nitrato    4) Utilización de compuestos nitrogenados 4.1) Reducción de nitrato   a) asimilación    b) denitrificación 4.2) Descomposición de carbohidratos aminoácidos y otros a) indol  b) H2S  c) Urea

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PRUEBAS BIOQUIMICAS a) TSI (Triple Hierro Lisina) 5) Ensayos combinados a) TSI (Triple Hierro Lisina) b) LIA (Agar Hierro Lisina)  c) Bilis esculina 6) Detección de exoenzimas a) proteasas, coagulasa b) acción de microorganismos sobre la sangre (hemolisinas)  

PRUEBAS BIOQUIMICAS 7) Misceláneos a) KCN b) Bilis       c) producción de pigmentos   8) Test de crecimiento o inhibición     a) Temperatura      b) NaCl       c) Antibióticos

 TABLA MODIFICADA DE COWAN´S & STEEL PARA IDENTIFICACION DE BATERIAS HETERÓTROFAS tinción gram  (cultivo fresco) + – forma coco bastón agrupación racimos cadenas tetradas   pares crecimiento   aerobio crecimiento   anaerobio esporas movilidad  + o – + o  – + o - catalase  oxidase  fermentación de  glucosa a acido   o a acido+gas + (o –) O/F  O F

Micrococcus X   Staphylococcus Streptococcus Lactococcus Enterococcus Leuconostoc Pediococcus Aerococcus Lactobacillus Clostridium Bacillus Alcaligenes Pseudomonas  Enterobacterias Aeromonas Chromobacterium Neisseria

PROCEDIMIENTOS Producción de Catalasa: Coloque una azada de crecimiento (célula) de cada uno de los cultivos sobre portaobjetos. Agregue 2 ó 3 gotas de peróxido de hidrógeno (H2O2) observe la formación o no de burbujas. Producción de Ureasa: 1. incube en los tubos con medio SSR, que contiene urea. 2. Incube a temperatura ambiente y observe los cambios de color durante 7 dias.

PROCEDIMIENTOS Producción de indol: inocule los cultivos en tubos con caldo nutritivo. incube a 37°C por 48 horas. Al cabo de este tiempo, añada en los tubos 0.5 ml del reactivo de Kovac’s. Mezcle bien por rotación del tubo entre las manos y examine después de un minuto. Producción de ácido sulfhídrico: Inocule los cultivo de los microorganismos en caldo nutritivo. incube los tubos a 37°C durante 7 días. Inserta una tira de papel de acetato de plomo en el tubo y examine el ennegrecimiento del papel.

Prueba O/F (oxido-fermentación): Medio de cultivo Hugh y Leifson con glucosa al 1%. indicador de acidez o alcalinidad: Bromotimol azul, coloración amarilla indica pH 6 o menos; coloración azul indica pH de 7 a 8. De cada cultivo inoculese por el método de punción dos tubos con el medio indicado, uno de ellos sin sellar (condiciones aeróbicas) y el otro sellado con parafina (condiciones anaeróbicas). incubese a temperatura adecuada por 2 o 3 días. obsérvese el crecimiento y el cambio de coloración del medio. Producción de ácido sulfhídrico: 1. Inocule los cultivo de los microorganismos en caldo nutritivo incube los tubos a 37°C durante 7 días. Inserta una tira de papel de acetato de plomo en el tubo y examine el ennegrecimiento del papel.

AREAS DEL CUERPO CON FLORA NORMAL 1. Piel y mucosas 2. Conjuntivas 3. Tracto respiratorio superior .Nasofaringe, Orofaringe, Cavidad oral 4. Conducto auditivo externo 5. Tracto gastrointestinal 6. Genitales externos 7. Vagina, endocervix, uretra anterior Debe reducirse al máximo la contaminación.

AREAS NORMALMENTE ESTERILES Tracto urinario : vejiga, úreter, riñón Glándulas salivales. Tracto respiratorio bajo Senos frontales, para-nasales Puede presentarse contaminación en la toma de la muestra.

LIQUIDOS NORMALMENTE ESTÉRILES 1. Sangre 2. LCR 3. Líquidos articulares, pericárdico, pleural, etc. 4. Médula ósea Cualquier contaminación debe ser prevenida en su colección y procesamiento

MUESTRAS QUE PUEDEN HOSPEDAR FLORA NORMAL 1. Orina 2. Esputo 3. Hisopados de heridas 4. Drenaje de abscesos 5. Materia fecal

FACTORES QUE INFLUYEN EN EL AISLAMIENTO DE UN AGENTE ETIOLÓGICO 1. El material utilizado para colectar la muestra 2. El medio de transporte en el cual lamuestra es colocada 3. El tiempo de la obtención de la muestra y su transporte hasta el laboratorio 4. La localización del proceso infeccioso.

CONDICIONES GENERALES DEL PACIENTE A. Paciente Asintomático B. Paciente Sintomático C. Paciente Inmunosuprimido D. Con condiciones de base Diabéticos Alcohólicos Cirróticos Edades extremas Cardiopatías Pneumopatías

Maria Teresa Naranjo Trujillo - Bacterióloga Salud Pública ¡MUCHAS GRACIAS! Maria Teresa Naranjo Trujillo - Bacterióloga Salud Pública