PROCESAMIENTO HISTOLÓGICO

PASOS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICA OBTENCIÓN DE MUESTRAS FIJACIÓN DESHIDRATACIÓN Y ACLARAMIENTO INCLUSIÓN CORTE MONTAJE TINCIÓN DE LOS CORTES

OBTENCIÓN DE MUESTRAS Todas las muestras de tejido, ya sea obtenidas de materiales quirúrgicos, necropsias, biopsias deben ser procesadas adecuadamente para obtener buenos cortes histológicos.

Se debe obtener toda la información posible del material a procesar. OBTENCIÓN DE MUESTRAS Se debe obtener toda la información posible del material a procesar.

OBTENCIÓN DE MUESTRAS En caso de ser necesario se debe realizar un examen y descripción preliminar de los materiales y su adecuación para un correcto procesamiento.

OBTENCIÓN DE MUESTRAS

FIJACIÓN Tratamiento del tejido con sustancias químicas que no solo retardan las alteraciones hísticas posteriores a la muerte, sino que conservan la configuración normal del tejido.

FIJACIÓN Fijador: Sustancia que detiene en forma rápida los procesos de autólisis y que, al mismo tiempo, conserva los tejidos, en lo posible, en el estado en que se encontraban en la vida.

FIJACIÓN Físicos: TIPOS DE FIJADORES Desecación: Extendidos, líquidos de punciones. Calor seco: Bacteriología. Calor húmedo: Microquímica, Zoología. Frío: No es una verdadera fijación. Detiene los procesos de autólisis y necrosis, pero cuando deja de actuar los mismos se reanudan.

FIJACIÓN Químicos: TIPOS DE FIJADORES Aldehídos (no precipitan proteínas y no contrae estructuras) . Mercuriales (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores). Alcoholes (precipitan proteínas). Agentes oxidantes (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores). Picratos (precipitan proteínas).

FIJACIÓN Químicos: TIPOS DE FIJADORES Aldehídos (formaldehido/glutaraldehido): Son los más utilizados. Los tejidos son fijados por uniones cruzadas en las proteínas, al reaccionar con los grupos amino. La Formalina (formaldehido al 40%), se utiliza normalmente al 10%, en una solución bufferada.

FIJACIÓN

No debe olvidarse que: FIJACIÓN Un defecto de fijación no puede ser subsanado. Es inútil hacer un estudio histológico de un material mal fijado.

DESHIDRATACIÓN Se obtiene por medio de un reactivo anhidro pero ávido de agua: Alcohol Etílico. Alcohol Isopropílico. Alcohol Butílico. Acetona

ACLARADO Se debe embeber la pieza con una sustancia miscible con el alcohol y la parafina: Xileno. Tolueno. Benceno.

INCLUSIÓN La parafina penetra en los vasos, en los espacios intercelulares y también en el interior de las células embebiendo el tejido y haciendo más fácil la obtención de cortes con el micrótomo.

Procesador Automático

Procesador Automático

CONFECCIÓN DEL TACO Obtención del bloque de parafina de forma regular, para ser cortado con el micrótomo.

CONFECCIÓN DEL TACO

CORTE Micrótomo Rotativo. Micrótomo de Deslizamiento. Micrótomo de Congelación. Crióstato.

Micrótomo Rotativo.

Micrótomo Rotativo.

Micrótomo Rotativo.

Crióstato

Crióstato

EXTENSIÓN Utilizar portaobjetos limpios y preparados con el adhesivo adecuado. Se realiza en agua tibia (38oC). Precaución: el preparado debe quedar bien extendido y sin pliegues. Rotular.

EXTENSIÓN Luego de escurrir el exceso de agua llevar a estufa (60 °C) no más de dos horas.

TINCIÓN DE LOS CORTES Los colorantes pueden agruparse en tres clases principales: Colorantes que diferencian los componentes básicos y ácidos de la célula (hematoxilina y eosina). Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular. Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales en ellos.

(que posean fosfatos, sulfatos y/o carboxilos ionizados) Colorantes empleados con mayor frecuencia en histología: HEMATOXILINA Actúa como un colorante BÁSICO que se asocia y tiñe componentes ÁCIDOS de la célula como estructuras aniónicas (que posean fosfatos, sulfatos y/o carboxilos ionizados) - Heterocromatina y nucléolos - ARN ribosomal, - Matriz extracelular (por los sulfatos de los GAGs). Color: azul o violeta EOSINA Colorante ÁCIDO (predomina densidad de carga negativa), que se asocia y colorea estructuras catiónicas (componentes BASICOS) del citoplasma y matriz extracelular - Filamentos citoplasmáticos. - Componentes membranosos intracelulares. - Fibras extracelulares (por sus aminoácidos básicos ionizados). Color: rosado

TINCIÓN DE LOS CORTES La reacción de los grupos aniónicos con un colorante básico se denomina BASOFILIA (que tiene afinidad por lo básico) La reacción de los grupos catiónicos con un colorante ácido se denomina EOSINOFILIA (que tiene afinidad por lo ácido)

Coloración con Hematoxilina Coloración con Eosina Coloración Hematoxilina-Eosina

Basófilo (azul) Acidófilo (rosado)