Katia Y. Rodríguez Berríos Keyla E. Torres Santos Universidad Interamericana Recinto de Bayamón Sistema de identificación Automatizado VITEK Katia Y. Rodríguez Berríos Keyla E. Torres Santos

Bosquejo VITEK Identificación Bacteriana Susceptibilidad a antibióticos Descripción del equipo Vitek 1 Vitek 2 Tarjetas para la identificación de microorganismos Tarjetas para determinar la susceptibilidad antimicrobiana Ventajas y desventajas de los sistemas automatizados

VITEK El sistema VITEK fue diseñado y manufacturado por el Laboratorio BioMérieux, ubicado en Argentina. Es un sistema automatizado para la identificación bacteriana y el estudio de la sensibilidad antimicrobiana. El sistema automático VITEK responde perfectamente a las necesidades de la bacteriología actual, tanto en el ámbito de la microbiología clínica, como en el de los controles industriales. La automatización en laboratorios tanto clínicos como industriales aporta mayor seguridad, suprimiendo las manipulaciones repetitivas, y la rapidez de respuesta que permite obtener resultados fiables más rápidamente que con las técnicas manuales.

VITEK La identificación bacteriana y pruebas de sensibilidad a los antibióticos juegan un papel esencial en el cuidado del paciente y el control de la resistencia a los antibióticos. Las pruebas de ID / AST también juegan un papel crucial en la vigilancia epidemiológica, ya que hace posible rastrear los cambios en los patrones de resistencia microbiana en los centros asistenciales. Primer punto a abundar: Indicando qué antibióticos tienen más probabilidades de curar una infección. La reducción de la prescripción empírica de antibióticos "de amplio espectro", que son en parte responsables del rápido aumento de la resistencia a los antibióticos. Evitando la prescripción innecesaria de antibióticos reduce los costes sanitarios. Pruebas de identificación son rápidas y fiables. Es importante reducir el tiempo de identificación para: mejorar la atención al paciente, gestión de los brotes, lucha contra las infecciones asociadas a la salud.

Identificación Bacteriana Las pruebas de identificación son rápidas y fiables. A nivel clínico es importante reducir el tiempo de identificación para: * mejorar la atención al paciente * Identificar brotes a tiempo * Lucha contra las infecciones asociadas a la salud

Prueba de susceptibilidad a antibióticos Las pruebas de sensibilidad a los antibióticos determina la susceptibilidad de una cepa bacteriana a un antibiótico específico o un grupo de antibióticos. El microorganismo se pone en contacto con el antibiótico y la prueba revela si el microorganismo crecerá o no en presencia del antibiótico. Esta información es expresada como la concentración inhibitoria mínima. Los médicos utilizan los resultados de las pruebas de sensibilidad a los antibióticos para ayudar a determinar el tratamiento más adecuado para la infección y el paciente individual. Las pruebas de sensibilidad a los antibióticos también se pueden utilizar para detectar la resistencia bacteriana a los antibióticos. (CMI), la medida de la susceptibilidad de un microorganismo o de resistencia a un antibiótico.

Descripción del equipo VITEK automatiza todas las etapas necesarias para la realización de las pruebas de identificación y antibiograma con las tarjetas VITEK. La identificación de las bacterias se basa en la inoculación de una suspensión de microorganismos en tarjetas con determinados paneles de reacciones bioquímicas. La sensibilidad antimicrobiana se lleva a cabo en forma similar a través de tarjetas que contienen diluciones estandarizadas de distintos antibióticos correspondientes a los puntos de corte de sensibilidad establecidos por CLSI. Está constituido por un inoculador/sellador, un incubador/lector, un ordenador y una impresora. El inoculador/sellador permite la inoculación de las tarjetas en pocos minutos. El incubador/lector asegura simultáneamente la incubación y la lectura de las tarjetas para una capacidad que varía de 32 a 480 tarjetas según el modelo. El ordenador equipado con los programas de VITEK efectúa un control permanente de las operaciones en curso, memoriza los valores, trata e interpreta los resultados. Los resultados se expresan +, - Un sistema óptico de transmitancia permite la interpretación de las reacciones de ensayo utilizando diferentes longitudes de onda en el espectro visible. Durante la incubación, cada reacción de prueba se lee cada 15 minutos para medir la turbidez o bien productos coloreados del metabolismo de sustrato.

VITEK 1 Originalmente diseñado por la NASA Utiliza sistemas de tarjetas con sustratos y antimicrobianos deshidratados Capacidad de 15 a 120 tarjetas Se realiza una suspensión estandarizada de la colonia que se inocula en la tarjeta y ésta es sellada e incubada en el equipo El equipo mide desarrollo microbiano mediante un lector óptico Mide colorimetría Tiempo de incubación de 4-18 Hrs

Preparación de la muestra Preparación de la suspensión Transferir colonias aisladas de un cultivo puro a un tubo de ensayo con 1.8 ml de solución salina. Estandarización del inoculo La turbidez del inoculo se ajusta al estándar Mc Farland de 0.5. Inoculación Las tarjetas de identificación es inoculada con la suspensión del microorganismo. Luego se aplica el vacío y la suspensión del organismo es forzada a través del tubo de transferencia hacia el interior de la tarjeta a través de micro-canales que llenan todos los pocillos que contienen los sustratos. Sellado de tarjeta e Incubación Tarjetas inoculadas pasan por un mecanismo, que corta el tubo de transferencia y sella la tarjeta antes de cargarla en la incubadora del equipo.

VITEK 1

VITEK 2 VITEK 2 es un sistema de microbiología automatizado que utiliza la tecnología basada en el crecimiento. Existen varios modelos como: VITEK 2 Compact, VITEK 2 y VITEK 2 XL que difieren en el aumento de los niveles de capacidad y automatización. Los tres sistemas acomodan las mismas tarjetas de reactivos colorimétricos que se incuban y se interpretan de forma automática. Identificación microbiana a través de colorimetría Susceptibilidad microbiana por CIM Lectura óptica cada 15 minutos Resultados de sensibilidad e identificación (5-15 Hrs) Tarjetas con 64 pocillos Vitek 2 compact: Este formato se centra en el entorno de pruebas de microbiología industrial al mismo tiempo tener la solicitud de baja de volumen medio de los laboratorios clínicos. Características desarrollados específicamente para microbiología industrial incluyen 21 CFR Parte 11 (para los registros electrónicos y firmas) y una tarjeta de reactivo colorimétrico (BCL) utilizado para identificar los bacilos Gram-positivo formador de esporas (es decir, Bacillus y géneros afines). Procesos completamente automatizados Dilución del inoculo Inoculación de las tarjetas Sellado de las tarjetas Carga en incubadora Transmisión de datos Vitek 2 y XL: Estos formatos se centran más en el laboratorio de microbiología clínica y proporcionar niveles de automatización y capacidad se incrementaron para los laboratorios de mayor volumen. También proporcionan una opción de pipeteo automático y dilución para las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos.

Preparación de la muestra Preparación de la suspensión Transferir colonias aisladas de un cultivo puro a un tubo de ensayo con 3ml de solución salina. Estandarización del inoculo La turbidez del inoculo se ajusta al estándar Mc Farland de 0.5 y se mide usando un medidor de turbidez llamado el DensiChek. Inoculación Las tarjetas de identificación es inoculada con la suspensión del microorganismo. Luego se aplica el vacío y la suspensión del organismo es forzada a través del tubo de transferencia hacia el interior de la tarjeta a través de micro-canales que llenan todos los pocillos que contienen los sustratos. Abundar Inoculación: El cassette puede albergar hasta 10 pruebas (VITEK 2 Compact; véase la Figura 3) o hasta 15 pruebas (VITEK 2 y VITEK 2 XL; véase la Figura 4). El casete lleno se coloca de forma manual (VITEK 2 Compact) o transportados automáticamente (VITEK 2 y VITEK 2 XL) en una estación de cámara de vacío. Las tarjetas se colocan de manera automática o manual dependiendo del equipo. Sellado de tarjeta e Incubación Tarjetas inoculadas pasan por un mecanismo, que corta el tubo de transferencia y sella la tarjeta antes de cargarla en la incubadora del equipo.

VITEK 2 VITEK 2 Compact

Tarjetas para la identificación de microorganismos La tarjeta VITEK esta destinada a la identificación o el antibiograma con los sistemas automáticos VITEK. Una vez inoculada, se encuentra herméticamente cerrada, y por tanto es manipulable sin riesgo de contaminación. Cada tarjeta de identificación posee 64 pocillos que contienen los substratos bioquímicos en forma deshidratada. Los sustratos miden diversas actividades metabólicas tales como la acidificación, la alcalinización, hidrólisis enzimática, y el crecimiento en la presencia de sustancias inhibidoras. No es necesario añadir ningún reactivo, lo cual evita cualquier riesgo de olvido o error. Se presenta en envase unitario, lo cual garantiza una perfecta conservación de las pruebas hasta el momento de su empleo. Del tamaño de una tarjeta de crédito, no ocupa espacio, ni para su conservación, ni para su eliminación.

Tarjetas para la identificación de microorganismos La identificación VITEK cubre mas de 300 especies encontradas en el campo de la microbiología clínica e industrial. Actualmente hay cuatro tarjetas de reactivos para la identificación de las diferentes clases de organismos de la siguiente manera: GN – Bacilos Gram negativos fermentadores y no fermentadores GP – cocos Gram positivos y bacilos no formadores de esporas YST – levaduras BCL – Bacilos Gram-positivos formadores de esporas

GN CARD

GP CARD

YS T CARD

BCL CARD

Tarjetas para determinar la susceptibilidad antimicrobiana AST - GN Enterobacteriaceae Non-fermenter group AST – GP Enterococcus spp. Staphylococcus spp. Streptococcus spp. AST – YST Candida spp. Crytococcus neoformans Transmittance reading at 660 nm 3 readings per well in 16 positions Transmittance value in the AST wells is compared to the control well (PC) Growth rate analysis every 15 min (kinetic) For each Antibiotic a specific algorithm converts raw data (RTU) to a calculated MIC

Gram Positivas Gram Negativas

Ventajas de los sistemas automatizados Estandarización de los procesos Proceso de incubación e inoculación corto Obtención de resultados en un tiempo corto (6-18 Hrs) Optimizan el tiempo del personal de laboratorio Librería taxonómica amplia Aplicación de programas que facilitan la interpretación de los resultados y análisis estadísticos Interpretación de resultados y Control de Calidad con estándares CLSI actualizados Precisión y reproducibilidad de los resultados Mayor bioseguridad y calidad de la información

Desventajas de sistemas automatizados Alto costo No está disponible para todo el espectro de bacterias Necesidad de cultivo puro Puede requerir el uso de pruebas complementarias

Gracias por su atención!