Los bacilos Gram positivos aerobios no esporulados forman un grupo heterogéneo de bacterias de difícil identificación, algunos considerados patógenos humanos.

Presentación del tema: "Los bacilos Gram positivos aerobios no esporulados forman un grupo heterogéneo de bacterias de difícil identificación, algunos considerados patógenos humanos."— Transcripción de la presentación:

1 Los bacilos Gram positivos aerobios no esporulados forman un grupo heterogéneo de bacterias de difícil identificación, algunos considerados patógenos humanos y otros oportunistas. Su rápida identificación es fundamental para los aspectos terapéuticos y epidemiológicos. En la actualidad se ha implementado el uso de técnicas moleculares para una correcta identificación bacteriana, siendo la secuenciación parcial del gen 16S ARNr la más utilizada. Sin embargo, este procedimiento requiere una carga laboral y consumo de tiempo importantes, lo cual dificulta su uso en el laboratorio clínico. La identificación bacteriana basada en la espectrometría de masa EM, ha demostrado su potencial para la identificación de microorganismos patógenos mediante el perfil de proteínas ribosomales. El objetivo de este trabajo es comparar los resultados de la identificación bacteriana utilizando perfil fenotípico (pruebas manuales y API), secuenciación del gen 16S ARNr, y EM (MALDI-TOF). Se estudiaron 58 aislamientos cl í nicos de diversos or í genes. La validaci ó n de la identificaci ó n por EM se realiz ó mediante secuenciaci ó n del gen 16SARNr (gold estandar) y en casos en que el porcentaje de similitud no superaba el 99%, se adicion ó la secuenciaci ó n del gen rpo. Se utilizaron cultivos frescos de los aislamientos bacterianos, que se analizaron seg ú n protocolos del fabricante (BrukerDaltonics), previa calibraci ó n con el est á ndar bacteriano y aplicando las t é cnicas recomendadas (Spot directo; Acido f ó rmico; Tubo de extracci ó n). Se compararon los perfiles obtenidos con la base de datos del equipo seg ú n los siguientes criterios de identificaci ó n: score ≥ 2.000 = identificaci ó n a nivel de especie, score 1.700-1.999= identificaci ó n a nivel de g é nero y score < 1.700= no identificaci ó n La ausencia del perfil de prote í nas de algunos microorganismos en la BD fue el motivo de la no identificaci ó n, por lo que resulta de gran importancia la carga de los perfiles de cepas caracterizadas por secuenciaci ó n a una BD propia. Se observ ó buena correlaci ó n al comparar resultados fenot í picos, secuenciaci ó n y EM, a ú n cuando é sta ú ltima arroj ó valores de score por debajo de 1.700, particularmente en el caso de las corinebacterias, por lo que se podr í an aceptar valores m á s bajos para una identificaci ó n confiable. Su aplicaci ó n en la identificaci ó n bacteriana en un laboratorio cl í nico, permite acortar los tiempos de respuesta, mejorar la exactitud de los m é todos convencionales y disminuir los altos costos involucrados. INTRODUCCIÓN MATERIALES Y MÉTODOS RESULTADOS CONCLUSIONES Del total de microorganismos estudiados, la identificaci ó n fenot í pica caracteriz ó el 65% a nivel de g é nero y el 24% a nivel de especie. La secuenciaci ó n identific ó el 90% de las especies y el 8% de los g é neros (seg ú n los criterios de interpretaci ó n establecidos por el CLSI), y la EM caracteriz ó correctamente el 81% de las especies y el 7% de los g é neros. Los m é todos adicionales no mejoraron el desempe ñ o de la EM con los aislamientos no identificados por m é todo directo. EVALUACIÓN DE LA ESPECTROMETRÍA DE MASA PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACILOS GRAM POSITIVOS NO ESPORULADOS F. Rocca, M. Prieto, L. Cipolla, C. Martínez, L. Aguerre, R. Callejo Servicio Bacteriología Especial. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”. Buenos Aires. Argentina. Identificación a nivel de género Identificación a nivel de especie