TEMA 3 ORGANIZACIÓN DEL MATERIAL HEREDITARIO EN PROCARIOTAS GENÓFORO DE LOS VIRUS -Características generales -Virus ADN-fago  GENÓFORO BACTERIANO -Cromosoma bacteriano -ADN extracromosómico: PLÁSMIDOS -clasificación -utilización tecnología ADN recombinante

GENÓFOROS VIRALES VIRIÓN (diámetro 10-400 nm) organización simple y acelular ausencia DNA y RNA en el mismo virión incapacidad reproducirse de forma independiente y llevar a cabo división celular DNA/RNA nucleocápside

GENÓFOROS VIRALES

VIRUS HEP. B VIRUS ARN-ADN Tipo de Molécula Tipo de Hélice Tipo de virus según huésped. Familia de virus Lineal Sencilla Animal Retrovirus (Ribodesoxivirus) - Sarcoma de Rous (Pollo) - Leucemia de Rauscher (ratón) - HIV (virus de inmunodeficiencia humana causante del SIDA) VIRUS ARN-ADN Tipo de Molécula Tipo de Hélice Tipo de virus según huésped. Familia de virus Circular Doble (gap) Animal Hepatitis B VIRUS HEP. B

GENÓFOROS VIRALES

FAGO  lisis bacteria ciclo lisogénico infecta E. coli cápside icosaédrica, DNA doble hélice lineal con ~ 48.000 pb extremos cohesivos: extremos 5’ monocatenarios (12 nucleótidos de secuencia complemenaria)

GENÓFORO BACTERIANO ADN  doble hélice circular  tamaño variable (0,1 a 8 x109 dalton)  E. coli (1.100 m longitud, 3,2 x105 pares nucleótidos) Material genético  NUCLEOIDE

GENÓFORO BACTERIANO ADN altamente organizado Plegamiento formando DOMINIOS SUPERENRROLLAMIENTO

GENÓFORO BACTERIANO Nº dominios en E. coli variable (12 a 80 dominios) Composición: ADN dúplex condensado + proteínas básicas

GENÓFORO BACTERIANO PROTEÍNAS BÁSICAS DETECTADAS EN BACTERIAS Proteína Composición Contenido por células Semejanza con eucariontes HU Dímero subunidades  y  de 9.000 d. 40.000 dímeros Histona H2A H Dímero subunidades idénticas de 28.000 d. 30.000 dímero Histona H2B IHF Subunidad  de 10.500 d. Subunidad  de 9.500 d. Desconocido Desconocida H1 Subunidad de 15.000 d. 10.000 copias HLP1 Monómero de 15.000 d. 20.000 copias P Sububnidad de 3.000 d. Protaminas

-Fis -Dan (DNA-binding protein under anaerobic conditions) = YgiP (Nucleic Acids Research, 2010, Vol. 38, No. 11 3605–3618)

ADN EXTRACROMOSÓMICO PLÁSMIDOS ADN doble y circular Replicación autónoma; información no vital Posibilidad de integración en cromosoma principal bacteriano  EPISOMA - secuencias inserción y transposones Tamaño variable: 2.000 a 100.000 pb ADN bacteriano plásmidos

TRANSFERENCIA FACTOR FERTILIDAD (F) ENTRE BACTERIAS  CONJUGACIÓN FUNCIÓN PLÁSMIDOS TRANSFERENCIA FACTOR FERTILIDAD (F) ENTRE BACTERIAS  CONJUGACIÓN F+ F-

FUNCIÓN PLÁSMIDOS Hfr factor F integrado en genóforo bacteriano transferencia de marcadores cromosómicos a F- con elevada frecuencia transferencia desde punto fijo y en un orden determinado (integración específica factor F)

FUNCIÓN PLÁSMIDOS plásmido E. coli resistente a ampicilina (ampr) y tetraciclina (tetr)

ESTIRPE A ESTIRPE B cys+, leu+, thr+ cys-, leu-, thr-- medio mínimo con: treonina leucina sin suplementos medio mínimo con leucina y treonina

A.- Medio mínimo con leucina y treonina: -cys+, leu+, thr+ -cys+, leu-, thr- B.- Medio mínimo con: - TREONINA: cys+, leu+, thr+ Y cys+, leu+, thr- LEUCINA: cys+, leu+, thr+ Y cys+, leu-, thr+ MEDIO MÍNIMO: cys+, leu+, thr+

TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE” comparación secuencias ADN de  genes  evolución -rasgos característicos gen (nº intrones, posición) -estructura producto proteico gen  FUNCIÓN modificación parte de secuencia ADN de un gen y reinserción CONSTRUCCIÓN ADN RECOMBINANTE

TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”

TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE” DIGESTIÓN ADN (enzimas de restricción) corte ADN en fragmentos para su clonación cortes escalonados  ADN recombinante

TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE” clonación gen específico

TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE” diseño plásmidos como vectores de clonación de ADN

TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”