Herpesvirus del ostión Jorge Cáceres-Martínez Rebeca Vásquez-Yeomans

Características morfológicas del OsHV-1 TEGUMENTO CÁPSIDE (116 nm) NÚCLEO ENVOLTURA Familia Malacoherpesviridae ADN lineal de doble cadena 207.4 kpb Forma esférica poligonal (icosaédrica)

Entre las especies donde se ha encontrado tenemos: Crassostrea virginica Crassostrea gigas Crassostrea ariakensis Ostrea edulis Ostrea angasi Tiostrea chilensis Ruditapes philippinarum Pecten maximus Nodipecten subnodosus

Diferentes variedades genéticas del virus de diferentes localidades Reece Lab-Moss et al. 2007 y Reece et al. datos no publicados; Reece, 2013

Estas variedades pueden tener diferente virulencia Las variedades de herpesvirus en zonas endémicas pueden tener diferente virulencia como el caso del OsHV-1 μVar, detectada en Francia Se requiere de mapas de distribución geográfica de las variedades de herpesvirus y sus hospederos

Distribución

Se ha demostrado transmisión horizontal % sobrevivencia Larvas de C. gigas, C. hongkongensis y C. ariakensis, expuestas a tejido infectado de C. gigas Días Kimberly S. Reece, 2011

El periodo de tiempo más largo para la detección de ADN en el OsHV-1 liberado a partir de larvas maceradas e inoculado en agua de mar fue de 22 días a 4°C y de 12 días a 20°C (Vigneron et al. 2004) Sin embargo, la relación entre la detección del ADN en la PCR y la infectividad del virus no se conoce Mayo, 2013

Se ha detectado en tejidos de ostras adultas, incluido el tejido gonadal (Arzul et al. 2002; Lipart & Renault 2002) Los adultos pueden ser un origen de la infección para las larvas Sin embargo, lo que no está claro es si se trata de una verdadera transmisión vertical (transmisión por los gametos) Mayo, 2013

Se ha detectado el ADN de OsHV-1 mediante PCR en tiempo real en el agua de alrededor de C. gigas enfermos (Sauvage et al. 2009) La enfermedad inducida por la variante OsHV-1 μVar puede ser transmitida experimentalmente a través del agua (Schikorski et al. 2011) Este es, presumiblemente, el principal modo natural de transmisión del OsHV-1 La transmisión a través del agua ayuda a explicar episodios de mortalidad distribuidos en parches en zonas de producción Mayo, 2013

Signos de la enfermedad en larvas y semilla Reducción en actividad de nado y alimentación Lesiones en manto y velo Nado errático en círculos, deposición en el fondo A nivel histológico en ocasiones se ven núcleos anormales con cromatina marginal

Eventos recurrentes, principalmente en verano CAUSAS Causa mortalidad de hasta 100 % en cultivos de larvas y juveniles de ostión Eventos recurrentes, principalmente en verano CAUSAS Compleja interacción de factores tales como, incremento de la temperatura, estrés fisiológico, malas prácticas y contaminantes, entre otros IFREMER

Impacto en la Industria ostrícola Francesa Francia produce 130,000 toneladas al año, siendo el cuarto productor a nivel mundial después de China, Japón y Corea del Sur

Problema de graves consecuencias en Francia OsHV-1 OsHV-1 µVar 2008-2011 A herpes virus has decimated oysters along France’s 5,500- kilometer coast for a fourth season

Diagnosis Incremento en la tasa de mortalidad Histopatología, permite observar lesiones típicas asociadas al virus y permite excluir otras posibles causas de mortalidad como protozoos parásitos PCR se usa para vigilancia y para confirmación de casos sospechosos Se utilizan diferentes iniciadores La falta de estandarización representa un problema potencial Los test actuales deben ser validados Hibridación in situ permite ubicar al virus en células y tejidos asociándolo con alteraciones e indicando su condición

Mayo, 2013 a = el método es el recomendado por razones de disponibilidad, utilidad y especificidad y sensibilidad de diagnóstico; b = el método es estándar, con buena sensibilidad y especificidad de diagnóstico; c = el método tiene aplicación en algunas situaciones, pero el costo, la precisión u otros factores limitan seriamente su aplicación; y d = el método no se recomienda actualmente para este fin

Hospedero Lugar Título Autor Año Revista C. gigas   Development of a loop-mediated isothermal amplification assay for rapid and sensitive detection of ostreid herpesvirus 1 DNA Ren et al. 2010 Journal of Virological Methods Francia Experimental ostreid herpesvirus 1 infection of the Pacific oyster Crassostrea gigas: Kinetics of virus DNA detection by q-PCR in seawater and in oyster samples Schikorski et al. 2011 Virus Research Italia Detection of Type 1 Ostreid Herpes variant (OsHV-1 μvar) with no associated mortality in French-origin Pacific cupped oyster Crassostrea gigas farmed in Italy Dundon et al. Aquaculture Suppression substractive hybridisation (SSH) and real time PCR reveal differential gene expression in the Pacific cupped oyster, Crassostrea gigas, challenged with Ostreid herpesvirus 1 Renault et al. Developmental & Comparative Immunology Evidence of herpesvirus (OsHV-1) resistance in juvenile Crassostrea gigas selected for high resistance to the summer mortality phenomenon Degremont Quantification of ostreid herpesvirus 1 (OsHV- 1) in Crassostrea gigas by real-time PCR: Determination of a viral load threshold to prevent summer mortalities Oden et al.

Hospedero Lugar Título Autor Año Revista C. gigas Francia, Jersey e Irlanda Detection of different variants of Ostreid Herpesvirus 1 in the Pacific oyster, Crassostrea gigas between 2008 and 2010 Martenot et al. 2011 Virus Research España First report of OsHV-1 microvar in Pacific oyster (Crassostrea gigas) cultured in Spain Roque et al. 2012 Aquaculture Francia Detection of the OsHV-1 μVar in the Pacific oyster Crassostrea gigas before 2008 in France and description of two new microvariants of the Ostreid Herpesvirus 1 (OsHV-1) Irlanda Investigation of mortality in Pacific oysters associated with Ostreid herpesvirus-1μVar in the Republic of Ireland in 2009 Peeler et al. Preventive Veterinary Medicine Ruditapes decussatus Detection of herpes-like virus in Venerupis (=Ruditapes) decussatus from Huelva coast (SW SPAIN) López-San Martín et al. 2013 Fish & Shellfish Immunology   Poly I:C induces a protective antiviral immune response in the Pacific oyster (Crassostrea gigas) against subsequent challenge with Ostreid herpesvirus (OsHV-1 μvar) Green y Montagnani Is horizontal transmission of the Ostreid herpesvirus OsHV-1 in Crassostrea gigas affected by unselected or selected survival status in adults to juveniles? Degremont et al.

Hospedero Lugar Título Autor Año Revista C. gigas Australia Influence of husbandry practices on OsHV-1 associated mortality of Pacific oysters Crassostrea gigas Paul-Pont et al. 2013 Aquaculture Australia y Francia Ontogeny and water temperature influences the antiviral response of the Pacific oyster, Crassostrea gigas Green et al. Fish & Shellfish Immunology Francia Size and genotype affect resistance to mortality caused by OsHV-1 in Crassostrea gigas Degremont   Genome exploration of six variants of the Ostreid Herpesvirus 1 and characterization of large deletion in OsHV-1μVar specimens Martenot et al. Virus Research

Herpesvirus OsHV-1 en México

Estudios de herpes virus en México Cáceres-Martínez, J. A. y R. Vásquez-Yeomans. (2003) Presence of giant polymorphic cells in Crassostrea gigas cultured in Bahia Falsa, Baja California NW Mexico. Journal of Shellfish Research. 22(3): 711-714 Vásquez-Yeomans, R., J. A. Caceres-Martinez y A. Figueras Huerta. (2004) Herpes-like virus associated with eroded gills of the Pacific oyster Crassostrea gigas in Mexico. Journal of Shellfish Research. 23(2): 417-419 Vásquez-Yeomans, R., A. M. García-Ortega y J. A. Cáceres-Martínez. (2010) Gill erosion and herpesvirus in Crassostrea gigas cultured in Baja California, México. Diseases of Aquatic Organisms. 89: 137-144 Cáceres-Martínez, J. A. y R. Vásquez-Yeomans. (2010) Presence of epibionts and herpesvirus in the lion-paw scallop Nodipecten subnodosus. En Aquaculture 2010 Del 01 al 05 de marzo. San Diego, California, Estados Unidos. World Aquaculture Society. Abstract. Chávez Romero, Y. A., J. A. Cáceres-Martínez, R. Vásquez-Yeomans y A. M. García -Ortega. (2011) Genetic characterization of ostreid herpesvirus associated with mortalities of Pacific oyster Crassostrea gigas in northwestern México. En 2011 International Malacology Reunion Del 27 al 30 de junio. La Paz, Baja California Sur, México. Western Society of Malacologists. Abstract. Grijalva-Chón, J. M., R. Castro-Longoria, J. Ramos-Paredes, T. L. Enríquez-Espinoza y F. Mendoza-Cano. (2013) Detection of a new OsHV-1 DNA strain in the healthy Pacific oyster, Crassostrea gigas Thunberg, from the Gulf of California. Journal of Fish Diseases. 36(11): 965-968.

Se han presentado episodios de mortalidades recurrentes de ostión en la región asociados con el Herpesvirus, especialmente en semilla y juveniles Al menos un episodio de mortalidades y bajo rendimiento de almeja mano de león Baja California Sonora Sinaloa Baja California sur

El primer registro se logró a través de MET Afecta al ostión Crassostrea gigas y a la almeja Mano de León

Lo podemos encontrar activo o en degradación dentro de las células de defensa de hospederos adultos Los adultos son menos susceptibles pero pueden ser portadores asintomáticos (Vásquez-Yeomans et al. 2010) A B Dégremont (2013) encontró mayor resistencia a mortalidad causada por OsHV-1 en ostiones de mayor edad y talla, lo que sugiere una maduración del sistema inmune en contra del virus. 100 µm 10 µm C D 10 µm 10 µm

? Evidencias y validación Alteraciones histológicas 3 MET Lesiones 4 2 b Lesiones 4 2 Mortalidades 1 HIS PCR- secuenciación 6

Presencia del OsHV en Baja California Año Mes Localidad Estadio de desarrollo Mortalidad 2002 Agosto Bahía Falsa Juvenil Sin datos 2005 Sin estimar 2006 Abril San Quintín Semilla (20-30 mm) 2008 Septiembre Adulto (115-123 mm) No Noviembre Adulto (83-110 mm) 2009 Junio Bahía de Todos Santos Semilla (3 mm) 70% Julio Semilla (2-3 mm) 97% 40% Laguna Manuela Semilla (20-37 mm) 85-95% Juvenil (48-68 mm) Semilla (11-20 mm) Juvenil (26-52 mm) Semilla (5-10 mm) Semilla (5- 20 mm) Diciembre Juvenil (30-45 mm) 2010 Enero Semilla (15-25 mm) Marzo Guerrero Negro Semilla (25-35 mm) 50% 2011 Flupsy – Ensenada Semilla (2-5 mm) 100% Semilla (8-10 mm) 79% 2 -37 mm 73% (40-97%) Verano

Presencia del OsHV en Baja California Sur. 5 -55 mm. AÑO MES LOCALIDAD ESTADIO DE DESARROLLO MORTALIDAD 2008 Noviembre Bahía Tortugas Juvenil (50-60 mm) No Juvenil (43-60 mm) Diciembre Juvenil (36- 52 mm) Sin estimar Juvenil (35-55 mm) 2009 Marzo Adulto (55-80 mm) Adulto (82-134) Abril Semilla (5-10 mm) 5 -55 mm.

Presencia del OsHV en Sonora. AÑO MES LOCALIDAD ESTADO DE DESARROLLO MORTALIDAD 2007 Enero El Riíto Adulto (74-90 mm) No Estero Morúa Adulto (82-113 mm) Marzo Bahía del Tobari Juvenil (36-55 mm) 80% Adulto (82-13 mm) Bahía de Kino Adulto (83-90 mm) Semilla (5-15 mm) 75% Mayo Adulto (80-100 mm) Noviembre Adulto (85-115 mm) 2008 Bahía San Jorge Adulto (65-92 mm) Juvenil (27-40 mm) 60-70% Semilla (15-20 mm) 70% 2009 Abril 100% Adulto (90-130 mm) 50% Adulto (85-105 mm) Sin estimar Estero Los Mélagos Semilla (10-15 mm) Estero La Cinita Juvenil (30-47 mm) 5-55 mm 80% (60-100%) Primavera

Presencia del OsHV en Sonora AÑO MES LOCALIDAD ESTADO DE DESARROLLO MORTALIDAD 2011 Marzo Estero La Cina Juvenil (40-53 mm) Sin estimar Estero La Santa Cruz Juvenil (38-50 mm)

Presencia del OsHV en Sinaloa AÑO MES LOCALIDAD ESTADO DE DESARROLLO MORTALIDAD 2005 Marzo Bahía de Altata Juvenil (30-47 mm) 70-80% Sinaloa Sinaloa 30 a 47 mm 75% (70-80%)

Cinco o más variedades Mexicanas de OsHV-1 Los resultados de secuenciación indican que las variedades encontradas en EUA y México, son más similares al OsHV-1 que al OsHV μVar Cinco o más variedades Mexicanas de OsHV-1 100 pb 600 pb M 1 2 3 4 5 6 7 8 Detection of Oyster herpesvirus (OsHV) using PCR: M) 100bp Molecular marker (Invitrogen); Line 1) Positive control (Genomic viral DNA, 100 ng per reaction); Lines 2, 8) Negative control (Sterile water); Lines 3 to 7) tissue samples. Tesis de Maestría de Yosef Amin Chávez Romero

¿Qué sabemos del herpesvirus? 1.- Se tienen evidencias de transmisión vertical de Herpesvirus en moluscos. 2.- Se ha demostrado transmisión horizontal en moluscos. 3.- Se ha encontrado que el Herpesvirus puede infectar diversas especies de moluscos. 4.- El Herpesvirus puede permanecer latente después de la primera infección. 5.- El Herpesvirus puede activarse en condiciones de estrés.

¿Se mantiene en el ecosistema? Posible ciclo de acción viral en el ambiente Semilla No Si Zona de cultivo OSTIÓN portador sano ESTRÉS MORTALIDAD Resistencia MERCADO HERPESVIRUS ¿Infección? ¿Infectada? ¿Se mantiene en el ecosistema?

Prácticas generales de manejo La bioseguridad puede aplicarse con éxito en laboratorios de producción de larva y semilla (hatcheries) Los herpesvirus son frágiles fuera de sus hospederos. La temperatura elevada, las sustancias químicas o la luz solar (UV) pueden destruir su cubierta de contenido lipídico Sin embargo, se ha demostrado que cada especie individual de virus herpes puede tener una estabilidad diferente frente al tratamiento de inactivación y que las sales inorgánicas como el Na2SO4 presentes en el agua de mar pueden estabilizar los virus herpes (Wallis & Melnick, 1965) Mayo, 2013

En laboratorios, los brotes de OsHV-1 pueden controlarse mediante una cuarentena y medidas de higiene como la inactivación del virus mediante el uso de tratamientos, como la irradiación ultravioleta del agua de recirculación y las tecnologías de filtración del agua Sin embargo, es necesario tener presente que la reducción de la carga vírica depende del título inicial y de la capacidad de reducción del virus que tengan las técnicas utilizadas para la inactivación. El equipo utilizado en una zona infectada no debe ser enviado y utilizado en una zona no afectada sin una limpieza y desinfección adecuadas

RECOMENDACIONES Evitar la introducción de moluscos bivalvos provenientes de zonas con antecedentes de mortalidad asociadas al OsHV-1 y OsHV-1 µVar y evitar la exportación de organismos provenientes de zonas con antecedentes de mortalidad asociadas al OsHV-1 y OsHV-1 µVar hacia zonas libres de herpesvirus para evitar su propagación Después de la aparición del OsHV-1 µVar, nuevas variantes siguen emergiendo. El número de mutaciones depende del número de ciclos de replicación durante la fase infectiva del virus, por lo tanto, es sumamente importante controlar los eventos de mortalidad ya que estos favorecen la aparición de mutantes Monitoreo ambiental (alerta temprana) Exigir y presentar certificados de sanidad en la comercialización de moluscos bivalvos Vigilar el cumplimiento de las buenas prácticas de producción acuícola Evitar la introducción de especies exóticas sin un estudio previo de carga parasitaria Crear un programa de selección genética de organismos resistentes al OsHV-1 y OsHV µVar Planificar épocas de siembra y manejo (desdoble)

Salud del agua Salud del sedimento Salud del organismo Temperatura Salinidad Oxígeno pH Conductividad Mareas Corrientes Nitritos Nitratos Amonio Clorofilas Turbidez Viento RED MAREOGRÁFICA REGIONAL RED NACIONAL DE MONITOREO ACUÍCOLA AMBIENTAL (RENAMOA) RENAMOA Salud del organismo Salud del agua Salud del sedimento

RED MAREOGRÁFICA REGIONAL RED NACIONAL DE MONITOREO ACUÍCOLA AMBIENTAL (RENAMOA) RENAMOA

Análisis de información RED MAREOGRÁFICA NACIONAL RED NACIONAL DE MONITOREO ACUÍCOLA AMBIENTAL RENAMOA RENAMOA RENAMOA RENAMOA RENAMOA RENAMOA RENAMOA RENAMOA Base de datos Análisis de información

Tríada de la enfermedad Estudio del hospedero Hospedero Tríada de la enfermedad NE Estudio del parásito-patógeno Estudio del ambiente Parásito Ambiente E INTERACCIÓN PARÁSITO-HOSPEDERO-AMBIENTE

Tétrada de la enfermedad Hospedero Ambiente NE Estudio: Parásito Manejo E INTERACCIÓN PARÁSITO-HOSPEDERO-AMBIENTE-MANEJO

Apoyo de: Dr. Miguel Ángel del Río Portilla (CICESE) Dra. Carmen Paniagua Chávez (CICESE) M.C. Mauricio García Ortega (ISA) Dr. Antonio Figueras (CSIC) Dr. Tristan Renault (IFREMER) Dra. Kimbery Reece (VIMS) Dra. Collen Burgen (Washington University) Dra. Carolyn Friedman (Washington University) Dr. James Moore (UC Davis) Tesistas: M.C. Yosef Amín Chávez Romero (CICESE) M.C. Jenniffer Villalva Vega (CICESE)

AGRADECIMIENTOS SUBNARGENA del CICESE

La investigación continua ¡Gracias!