Ingeniería Genética Clonación de genes

CONCEPTOS BIOTECNOLOGÍA Aplicación de procedimientos genéticos para crear nuevos organismos capaces de sintetizar productos específicos de alto valor comercial INGENIERÍA GENÉTICA Técnicas de manipulación del material genético que permiten transferir genes de unas células a otras. Se pueden introducir genes en el genoma de una célula que carece de ellos. Objetivos: Obtención de proteínas que tienen valor por sí mismas Producir efectos positivos en células receptoras

CLONACIÓN DE GENES CONCEPTO Método empleado en Ingeniería Genética consistente en obtener múltiples copias de un determinado gen utilizando el poder replicativo de los organismos vivos

ETAPAS DE LA CLONACIÓN DE GENES Obtención del gen que se desea clonar Recombinación con el vector de clonación para obtener ADN recombinante Incorporación del ADN recombinante en la célula hospedadora Detección del gen clonado Multiplicación de la célula hospedadora y del gen deseado

ETAPA 1: OBTENCIÓN DEL GEN DESEADO A) POR ENZIMAS DE RESTRICCIÓN

ETAPA 1: OBTENCIÓN DEL GEN DESEADO B) POR RETROTRANSCRIPTASAS Empleado cuando se desea clonar y expresar un gen eucariótico en células procariotas. Gen ADN (con intrones) Transcripción preARNm (con intrones) Procesado ARNm (sin intrones) Transcripción inversa Retrotranscriptasa Gen ADN (sin intrones)

ETAPA 2: FORMACIÓN DEL ADN RECOMBINANTE Gen deseado + Vector de clonación (virus o plásmidos)= ADN recombinante

ETAPA 2: FORMACIÓN DEL ADN RECOMBINANTE Tanto el vector de clonación como el gen que se desea clonar deben ser cortados por el mismo enzima de restricción

ETAPA 3: INCORPORACIÓN DEL ADN RECOMBINANTE A LA CÉLULA HOSPEDADORA Técnicas: Transformación, conjugación o transducción cuando la célula hospedadora es una bacteria. Microinyección, electroporación, microbalas de metal, … cuando la célula hospedadora es eucariota.

ETAPA 4: DETECCIÓN DEL GEN CLONADO EN LA CÉLULA HOSPEDADORA Técnicas: Detección de la proteína producida por el gen clonado. Utilización de marcadores (genes que ayudan a la identificación de las células que los contienen) en el vector de clonación. ETAPA 5: MULTIPLICACIÓN DE LA CÉLULA HOSPEDADORA Y DEL GEN DESEADO Al multiplicarse la célula hospedadora también se replica su ADN y, por tanto, el gen que se desea clonar, obteniendo muchas copias del mismo.

CLONACIÓN DE UN FRAGMENTO DE ADN MEDIANTE PLÁSMIDOS

OTRAS TÉCNICAS DE CLONACIÓN: REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) “In vitro” Mayor velocidad Pequeños fragmentos de ADN

OTRAS TÉCNICAS DE CLONACIÓN: REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)

OTRAS TÉCNICAS DE CLONACIÓN: REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)