Por: Angélica Aquino María garriga Meraris Soto Luis e. Oquendo Tinción de esporas, tinción de flagelos y otras pruebas para identificar bacilos Gram-positivos Por: Angélica Aquino María garriga Meraris Soto Luis e. Oquendo

Catalasa -, no formadores de esporas Bacilos Gram + Catalasa -, no formadores de esporas

Hay tres especies de Erysipelothrix: Erysipelothrix rhusiopathiae Erysipelothrix tonsillarum Erysipelothrix inopinata Erysipelothrix rhusiopathiae es la única que causa enfermedades en humanos

No formadora de esporas Tiende a formar largos filamentos No motiles Gram-positiva Catalasa negativa No formadora de esporas Tiende a formar largos filamentos No motiles Ureasa negativo Erisipeloide Produce H2S http://www.actasdermo.org/es/forma-cutanea-difusa-erisipeloide/articulo/13052968/

Sensible a: Resistente a: Penicilina Cefalosporinas Eritromicina Clindamicina Resistente a: vancomicina http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPages/A/Antibiotics.html

Deben ser cultivadas en caldo nutriente con: 1% de glucosa 5% de CO2 A 35 ˚C También crece en agar chocolate y agar sangre En agar sangre las colonias son no hemolíticas

Después de 48h de incubación se ven dos diferentes tipos de colonias Pequeña, forma lisa transparente, reluciente y bordes enteros Grande, colonias ásperas, estructura curvea, bordes irregulares

Aracnobacterium, 9 especies Aracnobacterium haemolyticum Aracnobacterium pyogenes Aracnobacterium bernardiae Catalasa negativa Agar Sangre Beta-hemólisis

Tinción de Flagelos

Tinción de flagelos Los flagelos son órganos de locomoción Los flagelos están compuestos por cerca de 20 proteínas, con aproximadamente otras 30 proteínas para su regulación y coordinación La flagelina es la principal del flagelo Tiene su origen en el protoplasma de la célula bacteriana

Tipos de flagelos

Métodos Kodak Método Leifson Cubrir la preparación durante 5 a 10 minutos Lavarlo por 2 ó 3 minutos Observar la placa de la periferia hacia el centro Método Leifson Fuscina básica en alcohol etílico Acido tánico en agua destilada Cloruro de sodio en agua destilada

Tinte RYU Se utiliza en el borde del cubreobjetos Después de 5 a 10 minutos se examina la muestra

No formadores de espora, actinomicetos aeróbicos filamentosos Bacilos Gram + No formadores de espora, actinomicetos aeróbicos filamentosos

Actinomicetos Grupo heterogéneo Bacterias filamentosas ramificadas Similar al crecimiento de hongos Aerobios / Anaerobios facultativos Crecimiento lento No motil

“Acid-fast stain” http://www.biotechinfo.in/study-material-/acid-fast-staining-by-ziehl-neelsen-method/

“Acid-fast Stain” http://www.highlands.edu/academics/divisions/scipe/biology/labs/rome/acid_fast_stain.htm http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/Lab%20Stuff/Stains/Bacterial%20Stains.htm

Nococardia spp. Presente en suelo y en material vegetativo No motil Parcialmente ácido-resistentes Se utiliza prueba modificada Utiliza ácido débil (0.5% a 1% H2SO4) En humanos causa infecciones pulmonares y subcutáneas sistémica afección al Sistema Nervioso Central La infección progresa rápidamente

Otros Actinomicetos A. madurae se diferencia por ser Xilosa positivo Actinomadura spp. Gordonia spp. A. madurae se diferencia por ser Xilosa positivo Reduce nitrato No tiene micelio No motil Parcialmente ácido-resistente

Rhodococcus spp. R. equis Parcialmente ácido-resistente. Se diferencia por exhibir colonias rosa-salmón en Agar Sangre Parecido a Klebsiella http://people.upei.ca/jlewis/html/lab_4_coryne-_mycobacterium.html

Identificación Actinomicetos

Formadores de esporas, no filamentosos, catalasa + Bacilos Gram + Formadores de esporas, no filamentosos, catalasa +

Esporas Resistentes a condiciones ambientales adversas. Organismos que producen esporas: Hongos Plantas Bacterias Clostridium difficile Permiten que el organismop sobreviva al ambiente. http://promocionxxii.med-unjfsc.edu.pe/2011/10/genero-clostridium.html

Formación de esporas

Tinción de Esporas Fijar la bacteria en la laminilla. Colocar un pedazo de papel toalla en la laminilla. Echar verde malaquita sobre el papel toalla.

Tinción de Esporas Calentar la laminilla por 5 minutos. Lavar el frotis con agua destilada. Cubrir el frotis con safranina por 30 segundos. 5. Remover el papel y lavar el frotis

Tinción de Esporas Lavar con agua destilada y secar. B. anthracis http://textbookofbacteriology.net/Anthrax.html B. anthracis

Bacilos formadores de esporas Gram positivos Catalasa positivos Aeróbicos / Anaeróbicos facultativos Muchas de las especies crecen en Agar de Sangre Bacillus spp. & Clostridium spp.

Bacillus spp. B. anthracis B. cereus B. thuringienses B. subtillis No motil No fermenta lactosa Infecciones humanas B. cereus Motiles Beta hemolítico B. thuringienses Insectos Beta hemolítico B. subtillis Aspecto liso, mucoide o rugoso insecticida

B. anthracis Son grandes, grises y planas. En Agar Sangre no son hemolíticas. Son halófilas y crecen en medios alcalinos. Susceptibles a penicilina, fluroquinolinas, entre otros. Simples o en cadenas.

“Medusa head” B. anthracis http://biogefahr.shopkeeper.de/cgi-bin/nw/biogefahr-de/ “Medusa head”

B. cereus Tiene dos enterotoxinas Crece a 37˚C en Agar Sangre. Emética Diarrea Crece a 37˚C en Agar Sangre. Resistentes a penicilina. Susceptible a vancomicina y clindamicina. Figura 16-19 Bacillus cereus en Agar de Sangre

Identificación de Bacilos Gram + Aeróbicos Bacilos Catalasa +, no formadores de esporas y no filamentosos

Características Generales Se encuentran en el ambiente (agua y suelo) con facilidad. No se consideran altamente patogénicos, mas sin embargo se están aislando en infecciones clínicas con mayor frecuencia. Unos pocos son menos comunes, mas causan enfermedades severas.

Diagrama de Identificación

Corynebacteria C. (ulcerans, diphtheriae, pseudotuberculosis) Catalasa + No motil CTBA (medio) forman “halo” marrón C. diphtheria No produce ureasa Fermenta glucosa y maltosa Reduce nitrato a nitrito Prueba de Elek para detectar toxina

Elek’s Test Corta papel de filtro de 75% diámetro de plato de agar y 2 cm de ancho. Saturar con antitoxina C. diphtheria y esperar que seque. Añadir suero de conejo y “potassium tellurite” al agar caliente.

Elek’s Test Coloca los papeles en el plato de agar caliente y deja que llegue al fondo. Luego de sólido, añade el organismo y pon paralelo a este, controles negativos y positivos. Incubar de 18- 24 horas.

Identificación de C. diphtheria

Rothia and Listeria Cocos Gram + Disimulan ser Bacilos Rothia spp. Listeria monocytogenes Cocos Gram + Disimulan ser Bacilos Familia Micrococcacea Nitrato + No motil Hidrolizan esculina Ureasa Negativa 2/3 catalasa + Bacilos Gram + Familia Listericea Catalasa + Hidrolizan esculina Motiles B-hemolíticos Crece en 6.5% NaCl

Resultados de Pruebas Bioquímicas Identificación y diferenciación de bacilos gram positivos

Pruebas de Identificación http://es.slideshare.net/jmhr23/bacilos-gram-positivos-aerobios-no-esporulados

Pruebas de Identificación https://www.scribd.com/doc/28806551/Bacteriologia-diagnostica

Pruebas de Identificación Tabla 1 – Identificación y Diferenciación de géneros relacionados Pruebas Listeria Lactobacillus Erysipelothrix Microscopia Cocobacilos Bacilos Catalasa + - Vancomicina S R Motilidad (flagelos) H2S Bilis Esculina NaCl 6.5% B hemólisis V S – Susceptible, R – Resistente, V - Variable http://bvs.panalimentos.org/local/file/Manual_Listeria_monocytogenes_2008.pdf

Pruebas de Identificación http://bvs.panalimentos.org/local/file/Manual_Listeria_monocytogenes_2008.pdf

Pruebas de Identificación Diferenciación de especies del género Bacillus Pruebas B. firmus B. subtillis B. sphaericus Catalasa + Espora + (central) Oxidasa - Licuefacción de gelatina Hidrólisis de almidón Citrato Crecimiento NaCl 7% d Reducción Nitrato Crecimiento anaeróbico Fermentación Glucosa L-arabinosa D-xilosa D-manitol Ureasa -  Motilidad VP Indol d – Reacción débil http://javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis404.pdf