Tutorial Zeiss 26 1 Tutorial de Uso Básico Zeiss 26

Tutorial Zeiss 26 2 Características Zeiss 26………………………… pag.3-4 Pasos iniciales Uso Zeiss 26……………………….….pag. 5 Luz Transmitida Trabajo con luz transmitida Campo Claro………………………………………………..….…pag.6 Trabajo con luz transmitida Contraste de Fases…………………………………………..…….…pag.7-8 Trabajo con luz transmitida Contraste Interdiferencial DIC……………….…………………………………..pag.9-10 Fluorescencia Trabajo con luz reflejada (fluorescencia)………………………..…………..…pag Zeiss 26 “ Tutorial de Uso”

Tutorial Zeiss 26 3 Zeiss 26 APLICACIONES. Microscopio de Fluorescencia Filtros : 1-DAPI9-VERDE15-ROJO25-TRIPLE Microscopio de Luz Transmitida -Contraste Interdiferencial (DIC) -Contraste de Fases (PH) -Campo Claro Localización : Microscopía Planta – 2

4Tutorial Zeiss 26 Zeiss 26 CARACTERISTICAS Filtros Fluorescencia: 1-Azul : BP 365 FT 395 LP397 9-Verde: ( ) FT510 LP Rojo: BP 546 FT 580 LP Triple: TBP(400/495/570) FT (410/505/585 ) TBP (460/530/610) TBP (460/530/610) Condensador : 0,9 Filtros/Anillos DIC -DIC I -DIC II -DIC III Filtros/Anillos Fases -Ph1 -Ph 2 -Ph3 Objetivos : x1,25 (Sin Fase ni DIC) x5 (Sin Fase ni DIC) x10 (Fase 1) x20 (Fase 2)(DIC 1) x40 oil (Sin Fase)(DIC) x63 oil (Fase 3)(DIC 3) Equipo conectado : -Cámara color baja resolución MTI - Monitor tiempo real SONY -Iluminador NAG f HBO 50 -PC

5Tutorial Zeiss 26 1-Encendemos el microscopio Zeiss 26 (botón lateral derecho). 2-Encendemos el Ordenador asociado ( PC) para acceder al programa de captura de imágenes. 3-Encendemos la cámara asociada al equipo para la captura de imágenes (cámara MTI). Pasos Iniciales Uso Zeiss 26

6Tutorial Zeiss 26 Trabajar en Luz Transmitida (Campo Claro)(BF) 2-Colocamos la Rueda en posición D( Campo Claro, luz transmitida Normal). 3-Retiramos de la vía de luz (desplazar a la izquierda): -el polarizador DIC y -el obturador de luz transmitida. 4- Con esta configuración ya es posible observar y capturar imágenes en condiciones de luz transmitida normal Colocamos la Rueda superior de filtros en posición D/Vacío. 1 3

7Tutorial Zeiss 26 Trabajar en Luz Transmitida (Contraste de Fases)(Ph) 1-Observamos las características de Fases que posee el objetivo con el que estamos trabajando (no todos los objetivos presentan Fases/Ph). Las características de Fase del Objetivo vienen marcadas en el mismo Objetivo (Ph1=fase 1; Ph2=Fase 2; Ph3=Fase 3) ó se pueden consultar en la guía del equipo disponible en la web. 2-Colocamos la rueda en la misma posición de Fases/Ph que el anillo de Fases marcado en el Objetivo con el que se está trabajando. 3-Retiramos de la vía de luz: -el polarizador DIC. -el obturador de transmitida

Tutorial Zeiss 26 8 Trabajar en Luz Transmitida (Contraste de Fases)(Ph) 4-Sacamos la Barra DIC/Fases hasta su posición más externa. La barra tiene 2 posiciones: -Interna (para ver en DIC). -Externa (para ver en Contraste de Fases). 5-El equipo queda configurado para capturar imágenes en Contraste de Fases 5

9Tutorial Zeiss 26 Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC) 1-Observamos las características DIC que posee el objetivo con el que estamos trabajando (no todos los objetivos presentan DIC). Las características de DIC del Objetivo (I= DIC I; II=DIC II; III=DIC III) ó se pueden consultar en la guía del equipo disponible en la web. 2-Para consultar el DIC del objetivo se puede retirar con CUIDADO la cuña y observar el número del DIC grabada en la misma. 1 2

Tutorial Zeiss Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC) 3-Colocamos la rueda en el nº DIC marcado en el objetivo con que trabajamos. 4-Introducimos en la vía de luz el Polarizador( hacia la derecha) y retiramos el Obturador de transmitida. 5-Insertamos la Barra DIC/Fases hasta su posición interna. La barra tiene 2 posiciones -Interna (para ver en DIC) -Externa (para ver en Contraste Fases) 6-El equipo queda configurado para ver y capturar en DIC 3 4 5

11Tutorial Zeiss 26 Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia) 1-Encender la lámpara de Fluorescencia. Antes de encender la lámpara de fluorescencia es necesario verificar en el Registro de Uso del equipo que han transcurrido un mínimo de 30 minutos desde la sesión previa ( recordar que existe riesgo de explosión de la lámpara de mercurio (vapores tóxicos) si se enciende en caliente). Para evitar la pérdida/quemado de la fluorescencia de nuestra muestra cada vez que no estemos capturando la imagen es recomendable USAR la “barra/obturador de Fluorescencia”: Introducimos la barra hacia el interior para cerrar la fluorescencia de forma temporal. Todos los microscopios de fluorescencia Zeiss presentan asociado un protector móvil de fluorescencia para el usuario que puede aplicarse/bajarse para evitar la visión directa de la fluorescencia (perjudicial) NORMAS BÁSICAS

Tutorial Zeiss Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia) Modo manual de la Fluorescencia. Para trabajar en el modo manual de fluorescencia NO es necesario encender el “Orbit”, es suficiente con girar la rueda de Filtros a la posición deseada en función del marcaje de nuestra muestra : 1-Azul/dapi.9-Verde.15-Rojo.25-Triple.

13Tutorial Zeiss 26 Unidad de Microscopía Centro de Investigación del Cáncer Campus Miguel de Unamuno Salamanca (Spain).