Hemólisis- Agar sangre GARCÍA RAMÍREZ ALICIA HERNANDEZ ORTIZ LAURA Medio de cultivo general, diferencial y de enriquecimiento con la adicción de sangre. Las hemolisinas son enzimas que lisan los hematíes. Las bacterias que producen estas enzimas presentan un halo transparente alrededor de las colonias a consecuencia de la lisis de los hematies. Para Staphylococcus son hemolisinas y para son Streptococcus son estreptolisinas. Se utiliza como sustrato agar sangre. Los microorganismos que proliferan en este agar liberan exoencimas con efectos destructivos sobre los glóbulos rojos

Hemólisis- Agar sangre Hemólisis: ruptura de los glóbulos rojos de la sangre al ser introducidos en una solución hipotónica, debida a la entrada de agua en la célula por un fenómeno de ósmosis. Hemólisis parcial:   producción de una zona coloreada de verde- grisáceo alrededor de una colonia en una placa de agar-sangre, causada por la descomposición parcial de la hemoglobina de los eritrocitos hasta llegara a la biliverdina. Esta zona es caracteristica de los neumococos y de algunos Streptococcus Hemólisis total: producción de una zona coloreada de amarillo más o menos claro en una placa de agar sangre producida por la acción de algunas bacterias sobre la hemoglobina hasta llegar a la biliruvina

Hemólisis- Agar sangre La Base de Agar Sangre generalmente es suplementada con sangre de carnero, conejo o caballo al 5-10% para aislar cultivar y estudiar reacciones hemolíticas de una amplia variedad de microorganismos fastidiosos patógenos. La Base de Agar Sangre es una modificación del medio “Hormone” de Huntoon con una ligera composición ácida. La infusión de músculo de corazón y la peptona de caseína proporcionan la fuente de nitrógeno, carbono, aminoácidos y proteínas. El extracto de levadura provee vitaminas y aminoácidos esenciales. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es usado como agente solidificante. Este medio está relativamente libre de azúcares reductores los cuales interfieren en las reacciones hemolíticas de estreptococos. El patrón de las reacciones hemolíticas puede variar dependiendo del tipo de sangre utilizada.

Hemólisis- Agar sangre Los estreptococos hemolíticos presentan colonias translúcidas u opacas, grises, pequeñas y mucoides con una zona de hemólisis. Otros organismos que pueden producir hemólisis incluyen a Listeria, varias conirebacterias, Staphylococcus hemolíticos, E. coli y Pseudomonas. Las colonias de neumococcos aparecen planas, lisas, translúcidas, grisáceas y algunas veces mucoides rodeadas por una pequeña zona verdosa de alfa hemólisis.Las colonias de Staphylococcus tienen una apariencia opaca, de color blanco a amarillo y rodeadas de una zona clara por la beta hemólisis. Método: Suspender 40 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121 °C (15 libras de presión). Enfriar a una temperatura entre 45-50 °C y añadir, de preferencia, sangre de carnero estéril y desfibrinada al 5%. Homogeneizar y vaciar en placas Petri estériles.

Hemólisis- Agar sangre Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemólisis que posee: Hemolisis de Streptococcus spp. (izquierda) alfa hemolisis (S. mitis); (en medio) Beta hemolisis (S. pyogenes); (derecha) gamma hemolisis (= no hemolítico, S. salivarius) Hemolisis parcial: halos verdosos (α) Hemolisis total: halos incoloros (β) Sin Hemolisis: inexistencia de halos (γ)

HEMOLISIS GAMMA HEMOLISIS ALFA HEMOLISIS BETA SIN CRECIMIENTO SIN RESULTADOS

Degradación del almidón- Agar almidón Los polisacaridos, como el almidón son demasiados largos para ser transportados al interior de la célula. Los microorganismos excretan amilasas que hidrolizan esos polímeros hasta oligo o monosacáridos que pueden usarse como sustratos para crecer.

Degradación del almidón- Agar almidón Agar almidón; este medio tiene como componente principal el almidón, este es producido principalmente por plantas superiores, está compuesto de amilosa y amilopectina. Diversas enzimas amilolíticas hidrolizan almidón y sus productos. El lugol con el almidón forman un complejo color azul que no se presenta cuando el almidón ha sido degradado.  

Degradación del almidón- Agar almidón Una prueba positiva se revela añadiendo solución de lugol (ver Tinción de gram) por la aparición de zonas incoloras alrededor de las colonias; si la prueba es negativa el medio se tiñe totalmente de azul-púrpura.

Degradación del almidón- Agar almidón Se sabe que el B. cereus es resistente al colorante o sustancia (lugol) y puede hidrolizar al almidón formándose un halo transparente alrededor del almidón. B. Megaterieum no degrada el almidon por lo tanto es negativo. B. Subtitlis es positivo.  

Degradación del almidón- Agar almidón ( + ) ( - ) Bibliografía Libro de Bailey Scott Diagnóstico Microbiológico http://edicion-micro.usal.es/web/identificacion/AyudaPruebas.html