Genotipado de proteínas lácteas Sexaje de embriones APLICACIÓN DE LA PCR A LA TIPIFICACIÓN DE GENES DE INTERÉS EN PRODUCCIÓN ANIMAL Genotipado de proteínas lácteas Sexaje de embriones

- Existían grandes desequilibrios en la producción. Universidad de Zaragoza PRODUCCIÓN LÁCTEA: - Existían grandes desequilibrios en la producción. - Incapacidad de absorber los excedentes. - Necesidad de derivar la producción hacia derivados lácteos.

- Genotipado de proteínas lácteas con influencia Universidad de Zaragoza - Genotipado de proteínas lácteas con influencia en producción (calidad y cantidad) láctea. - Elección del sexo en embriones antes de transferencia. Tipado de sexo y proteínas lácteas en embriones. Detección de hembras Free-Martin

CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE Universidad de Zaragoza CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE PROTEÍNAS LÁCTEAS BB Kappa Casein

CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE Universidad de Zaragoza CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE PROTEÍNAS LÁCTEAS PROTEÍNAS DEL CUAJO PROTEÍNAS DEL LACTOSUERO - LGBB - LAA - CASK - CASB -CASA1 -CASA2 P.C.R.

CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE PROTEÍNAS LÁCTEAS (CASK) Amplificación por PCR Alelo Específico (A.S.O.)

CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE PROTEÍNAS LÁCTEAS (CASA2) Universidad de Zaragoza CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE PROTEÍNAS LÁCTEAS (CASA2) Exón VIII Intrón VIII Intrón VII Oli 31 Oli 32 Mnl-1 Ser Ser Glu CASA2A TGT ACT GAG GTAAG CASA2D TGT ACT GAT GTAAG

Mnl-1 Ser Ser Glu CASA2A TGT ACT GAG GTAAG CASA2D TGT ACT GAT GTAAG Universidad de Zaragoza Ser Ser Glu CASA2A TGT ACT GAG GTAAG CASA2D TGT ACT GAT GTAAG Mnl-1 396 bp PCR Mnl-I 272 bp 124 bp 396 bp CASA2A 396 bp CASA2B

CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE PROTEÍNAS LÁCTEAS (CASA2) Universidad de Zaragoza CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE PROTEÍNAS LÁCTEAS (CASA2) - + DD AA AD

1 . CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE Universidad de Zaragoza 1 . CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE PROTEÍNAS LÁCTEAS CASKB/CASBB/LGBB

TIPIFICACION DE EMBRIONES Universidad de Zaragoza TIPIFICACION DE EMBRIONES PROGRAMAS DE TRANSFERENCIA EMBRIONARIA DETECCIÓN DE GENES DE INTERÉS ELECCIÓN DEL SEXO SEXAJE DE EMBRIONES DETECCIÓN DE PROTEÍNAS LÁCTEAS

Determinación genética del sexo “Sistema XY” XX - Mamiferos XY - Aves y algunos peces “Sistema ZW” ZW - ZZ - “Sistema X: A” XX - Insectos X -

SELECCIÓN ARTIFICIAL DEL SEXO Universidad de Zaragoza SELECCIÓN ARTIFICIAL DEL SEXO Separación de espermatozoides X e Y (basado en la diferente masa, movilidad, contenido DNA, carga y antígenos de superficie) Citómetro de flujo - Cromatografía Sexaje de embriones antes de la implantación. - Métodos No invasivos - Enzimas ligadas al cromosma X (Toxicidad) - Detección Ag HY (Falsos positivos) - Métodos invasivos: Biopsia embrionaria

Separación de espermatozoides X e Y - Por diferencias de masa: el cromosoma Y tiene un peso menor en un 4,2% que el cromosoma X en bovino por lo que tienen distinta velocidad de sedimentación - Por diferencias de movimiento: los espermatozoides Y se mueven a mayor velocidad que los espermatozoides X - Por diferencias en el contenido de DNA mediante citometría de flujo. Se tiñe el DNA del espermatozoide con fluorocromos - Por diferencias en antígenos de superficie: se basa en la detección del Antígeno Y de histocompatibilidad. Solo lo tienen los espermatozoides Y

Manipulación de embriones Métodos invasivos : obtención de una biopsia en estado de blastocisto (en bovino a los 7 días). la cantidad de DNA obtenido a partir de una biopsia equivale a aproximadamente a 10 células (aprox. 100 pg) Análisis de regiones de DNA del cromosoma Y Análisis de cariotipo

XY XX

(Análisis de zonas de DNA del Cr Y) Universidad de Zaragoza SEXAJE DE EMBRIONES (Análisis de zonas de DNA del Cr Y) + - ZONAS DE COPIA ÚNICA AMPLIFICADO EN Y MENOR SENSIBILIDAD ZONAS REPETIDAS SÓLO AMPLIFICADO EN MAYOR SENSIBILIDAD

ZFX/ZFY BRY4a + - ZONAS DE COPIA ÚNICA ZONAS REPETIDAS Universidad de Zaragoza 2. SEXAJE DE EMBRIONES + - ZONAS DE COPIA ÚNICA ZFX/ZFY ZONAS REPETIDAS BRY4a

ZONAS DE COPIA ÚNICA ZFX ZFY Pst-1 SEXAJE DE EMBRIONES Universidad de Zaragoza SEXAJE DE EMBRIONES ZONAS DE COPIA ÚNICA ZFX ZFY Pst-1

Sexaje y genotipado de proteínas lácteas en el embrión Universidad de Zaragoza Sexaje y genotipado de proteínas lácteas en el embrión

SEXO/CASB SEXO/CASK TIPAJE DE EMBRIONES (Zona BRY 4a) AB AA AB AA BB Universidad de Zaragoza TIPAJE DE EMBRIONES (Zona BRY 4a) SEXO/CASB AB AA SEXO/CASK AB AA BB

l / 20 l / 50 ZFY/ZFX BRY4a/CASK DETECCIÓN DE ANIMALES FREE-MARTIN Universidad de Zaragoza DETECCIÓN DE ANIMALES FREE-MARTIN FREEMARTINISMO: Originado por la fusión de los coriones de dos embriones (macho y hembra) que lleva consigo un quimerismo XX/XY y afecta negativamente a las caracteristicas reproductivas de las hembras. Diluciones detectadas ZFY/ZFX l / 20 BRY4a/CASK l / 50