Obtención de Agentes de Control Biológico . Montevideo, 21 de febrero de 2003

Objetivos: Transmitir la importancia de los procesos de búsqueda y selección de ACB como base del éxito de un programa de CB. Analizar las diferentes vías o caminos posibles en el proceso de búsqueda y selección. Discutir los factores que condicionan estos procesos. Comprender como los resultados finales pueden estar condicionados por las técnicas utilizadas. Analizar posibles estrategias de búsqueda y selección de ACB

Aislamiento de ACB Aislamiento de ACB ¿Dónde encontrar ACB? ¿Cómo aislar? ¿Cualquier antagonista? ¿Qué características deseamos encontrar?

Importancia del aislamiento y selección “El aislamiento y la selección de microorganismos antagonistas sustentan a todo Programa de Control Biológico determinando las chances de éxito”. (Bettiol 1991) El número de microorganismos en una comunidad microbiana es inmenso. En la rizosfera de un árbol de roble se calcula que existen 45 mil billones de m. o. (45 x 1015)

Dónde encontrar ACB En cualquier lugar puede existir algún microorganismo antagonista. Muchos m.o. valiosos se encuentran en forma azarosa.

Dónde encontrar ACB En cualquier lugar puede existir algún microorganismo antagonista. ¿Existe algún lugar donde sea más probable hallarlo? En aquellos sitios donde coincidiendo la presencia del patógeno, la planta huésped y el ambiente favorable al desarrollo de la enfermedad esta no ocurre, es posible que allí esté funcionando naturalmente algún tipo de biocontrol.

Dónde encontrar ACB cont.. Esto puede suceder naturalemente: suelos supresivos Podemos forzar la situación: Colocamos plantas o frutos en situaciones favorables al desarrollo de la enfermedad y seleccionamos aquellos individuos que se mantuvieron sanos. Monilinia fructicola en duraznos. Penicillium expansum en manzana.

Selección de ACB para Monilinia Aislamiento

Algunos lugares Suelos supresivos Sobre las partes aéreas de las plantas (m.o. epifíticos, o del filoplano) Sobre la superficie de las raíces (rizoplano) Colonizando a patógenos Dentro de la planta (endofitos) Fitopatógenos (razas leves o avirulentas)

¿Por qué sobre la planta? Porque se ha demostrado que sobre la planta viven numerosos m.o. entre los cuales existen antagonistas de los patógenos y promotores de las defensas de las plantas.

¿Por qué sobre la planta? En el agua de lavado concentrada crecen solamente bacterias y levaduras

Aislamiento de frutos We have developed a simple yet powerful system of isolating potential antagonists for postharvest disease control. It involves washing the surfaces of fruits and vegetables and inoculating the washings along with the rot pathogen in wounds on fruit. The surfaces washings contain hundreds of microorganism some of which might make good antagonists. The wounded and inoculated fruit are incubated until rot develops. Occasional wounds on the fruit do not develop an infection. It is suspected that such wounds might have an antagonist from the washings that is inhibiting rot fungi from developing. Uninfected wounds are cut out of the tissue and macerated in sterile distilled water and plated on a nutrient medium. If uniform growth develops, it is suspected that an effective antagonist has occupied the wound site and prevented decay. Dilution plates of the isolates are make to verify the purity of the isolate. To verify that the isolate is truly an antagonist it is placed in fruit wounds that are subsequently inoculated with the pathogen. If decay is prevented an antagonist has been isolated.

¿Por qué sobre la planta? Porque se supone que si están allí es porque están adaptados a vivir en esas condiciones. Si queremos controlar a un patógeno que ingresa por heridas nos interesa que nuestro antagonistas sea un buen colonizador de heridas.

¿Por qué sobre la planta? Porque existe mayor aceptación por parte de los consumidores a admitir a los m.o. que naturalmente viven sobre la planta que a otros extraños.

Colonizadores de patógenos Se pueden encontrar antagonistas colonizando naturalmente a los patógenos de plantas. Se pueden utilizar a los patógenos como cebo para capturar a sus antagonistas.

Colonizadores de patógenos

Endófitos Para superar una de las limitantes mayores del CB. Obtener antagonistas con capacidad curativa. Control de patógenos vasculares.

Aislamiento En medio generales Selectivamente Hongos Bacterias Capaces de digerir al patógeno

Selección In vitro In vivo Intermedios Cultivos duales Inoculación en plantas Intermedios utilizando trozos de vegetal

Cultivos duales Consiste en sembrar en una misma placa enfrentados al antagonista y al patógeno

Selección “in vitro” Fácil de realizar Rápida Menor costo relativo. Solamente selecciona por algunos mecanismos de acción, descartando antagonistas que podrían funcionar sobre la planta. Tiene baja correlación con la performance a campo.

Selección “in vivo” Consiste en inocular plantas con el patógeno y al antagonista

Selección sobre frutos

Selección “in vivo” Selecciona independientemente de los mecanismos de acción antagónica. Implica un mayor trabajo Mayor tiempo Mayor costo relativo. Mayor equipamiento (Plantas, invernáculo, personal, etc)

Selección combinada Consiste en inocular tejidos vegetales en el laboratorio.

Otras consideraciones ¿A quién debe enfrentar nuestro antagonista? ¿En qué condiciones? Elección de la cepa más agresiva Elección de la cepa más resistente a fungicidas

Resumen final El aislamiento y selección de antagonistas es un proceso fundamental en cualquier programa de control biológico. Las técnicas utilizadas pueden sesgarnos los resultados. No existe una única estrategia de trabajo. El arte está en diseñar aquella estrategia que nos conduzca en la forma más directa hacia nuestro objetivo final.