405 543 633 488 UV LASERS FUENTES

(dos posiciones, una para cada set de lásers) UNIDAD DE BARRIDO Llave Vertical (dos posiciones, una para cada set de lásers) X No tocar!! (Se desalinean los lásers). Abajo : 405/488/543 Arriba : 633/488/543

Llave de Espejo Dicroico Canal 2 Canal 1 >570 < 570 Llave de filtros - adentro: se interpone el filtro afuera: no se filtra >510 Llave de filtros 430 - 460 Laser Laser 560-600 >660 Laser 488 Laser 633 Llave vertical Laser 405 (UV) Objetivo Plano del preparado Arriba Abajo

En suma: Llave Vertical Llave de Espejo Dicroico Dos posiciones, una para seleccionar con qué set de lásers se va excitar la muestra: Abajo : 405 – 488 – 543 Arriba : 633 – 488 – 543 Llave de Espejo Dicroico Tres posiciones, para seleccionar con cuál canal se va a detectar la emisión: - Adentro: Canal 1 - Afuera: Canal 2 - Intermedia: Ambos (< 570 va a Canal 1 y >570 va a Canal 2). Llaves de filtros Para filtrar la luz emitida según el espectro del fluoróforo. Dos posiciones: adentro: se interpone el filtro afuera: no se filtra Los filtros instalados son: Canal 1: 430-460 (por ej DAPI) Canal 2 :560-600 (por ej. TRICT) >510 (por ej. FICT) >660 (por ej. Cy5) NOTAR QUE: Si está acostumbrado a chequear con el software la configuración, tenga en cuenta que para FICT y afines le va a seguir indicando los filtros 510 y 530, aunque ahora sólo usaremos el 510

Hay 10 combinaciones posibles Las 7 combinaciones básicas y 3 más Las 7 básicas se pueden combinar en simultaneo con luz transmitida

Registro en canal 2 (Llave Espejo Dicroico Afuera) Canal 2 Llave de Espejo Dicroico: Afuera Opción 1: Quiero ver una marcación Con texas red o similar (rojo) Láser 543 prendido Llave vertical irrelevante Shutter abierto (software) Registro en canal 2 (Llave Espejo Dicroico Afuera) Filtro Rojo activo Canal 2 >570 Filtro Rojo (560-600) Llave vertical objetivo 560-600 Plano del preparado

Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro) Canal 1 Llave de Espejo Dicroico: Adentro Opción 2: Quiero ver una marcación Con FITC o similar (verde/amarillo) Laser 488 prendido Llave vertical irrelevante Shutter abierto (software) Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro) Filtro Verde Activo Canal 1 < 570 Laser 488 objetivo >510 Plano del preparado

Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro) Llave de Espejo Dicroico: Adentro Canal 1 Laser uv Llave vertical objetivo Plano del preparado < 570 Opción 3: Quiero ver azul (i.e. DAPI) Laser UV prendido Llave vertical abajo Shutter abierto (software) Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro) Filtros azul activo 430 - 460

Registro en canal 2 (Llave Espejo Dicroico Afuera) >570 Llave de Espejo Dicroico: Afuera Canal 2 Opción 4: Quiero ver Rojo lejano Laser 633 prendido Llave vertical para arriba Shutters abierto (software) Registro en canal 2 (Llave Espejo Dicroico Afuera) Filtro rojo lejano activo >570 Laser 610 Laser 633 Llave vertical objetivo Filtro Rojo (> 660) 633 >660 Plano del preparado

Llave de Espejo Dicroico: Intermedia Canal 2 Canal 1 < 570 Opción 5: Quiero ver doble marcado FITC y Rojo lejano Laser 633 prendido Laser 488 prendido Llave vertical para arriba Shutters abiertos (software) Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros rojo lejano y verde activos >570 Llave vertical Laser 488 Laser 633 objetivo >510 >660 Plano del preparado

Llave de Espejo Dicroico: Intermedia Canal 2 Canal 1 Llave de Espejo Dicroico: Intermedia >570 < 570 Opción 6 (menos especifica que la anterior): Quiero ver doble marcado Con texas red o similar (rojo) Y con FITC o similar (verde amarillo) Laser 488 prendido Laser 543 prendido Llave vertical irrelevante Shutters abiertos (software) Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros Rojo y Verde activos Laser 488 objetivo 560-600 >510 Plano del preparado

Llave de Espejo Dicroico: Intermedia Opción 7 : Quiero ver texas red y fluorescente azul (i.e. DAPI) Decir los problemas Laser UV (405) prendido Laser 543 prendido Llave vertical para abajo Shutters abiertos (software) Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros azul y rojo activos Canal 2 Canal 1 < 570 >570 Laser 546 Llave vertical Laser UV objetivo 560-600 Plano del preparado 430 - 460

Tres opciones mas Dos de triple marcado y una de cuádruple marcado

Canal 2 Canal 1 >570 < 570 Opción 8 (para triple marcado): Quiero ver FITC, Rojo lejano y AZUL Láser 633, 488 y UV (405) prendidos Primera pasada Shutters 633 y 488 abiertos (software) Filtros rojo y verde activos Llave vertical para arriba Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Segunda pasada Llave vertical para abajo Shutters UV (405) abierto (software) Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro) Filtro Azul activo Laser UV Llave vertical objetivo Plano del preparado Laser 610 Laser 488 Laser 633 Llave vertical objetivo >660 >510 430 - 460

2 fluorocromos y luz transmitida

Canal 2 Canal 1 Opción 9 (poco probable porque TxR y Rojo lejano cerca): Quiero ver texas red, rojo lejano y azul (i.e. DAPI) Laser UV (405), 543 y 633 prendidos Primera pasada Llave vertical para abajo Shutters UV, 543 abiertos (software) Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros azul y rojo activos Segunda pasada Llave vertical para arriba Shutter 633 abierto Registro en canal 2: (Llave Espejo Dicroico Afuera) Filtro rojo activo >570 < 570 Laser uv Laser 546 Laser UV Llave vertical objetivo Laser 610 Laser 633 Llave vertical objetivo 560-600 430 - 460 >660 Plano del preparado

Canal 2 Canal 1 >570 < 570 Laser 633 Laser 488 Laser 546 Opción 10: Ud es exigente y quiere ver todo Todos los Lasers prendidos Primera pasada Shutters 546 y UV abiertos Llave vertical para abajo Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros Rojo y UV activos Segunda pasada Shutters 633 y 488 abiertos Llave vertical para arriba Filtros rojo lejano y verde activos o si Ud prefiere al revés puede ser también >570 < 570 Laser 610 Laser 488 Laser 633 objetivo Llave vertical Laser uv Laser 546 Laser UV Llave vertical objetivo Plano del preparado

Sequential scan con canales virtuales 3 o 4 fluorocromos y luz transmitida NOTAR que el programa no acepta ingresar más de dos fluorocromos, el tercero se especifíca después (cuando se agrega el canal virtual)

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Si tiene cualquier duda o piensa que necesita algún cambio de configuración CONSULTE a la COMISIÓN. No haga cambios sin avisar al resto!! Así evitaremos pérdida de tiempo y hasta de preparados de todos.

Por cualquier consulta a la hora de usar el microscopio me peden encontrar de lunes a jueves de 13 a 17hs y los viernes de 9 a 13 hs en el interno 123 del IIBCE. Mi mail es marce_d@yahoo.com Marcela Díaz Investigadora contratada Grado 1 del servicio de microscopia confocal IIBCE