Química Forense Mg. Rinaldi, Diego S.

Tema 6 Delitos contra la integridad sexual

Aspecto legal Delitos contra la Integridad Sexual (Código Penal- Titulo III del Libro segundo- Ley 25.087 y modificatorias). Dentro de este grupo están los siguientes delitos: abuso sexual simple (art. 119 1° párrafo) abuso sexual gravemente ultrajante (art. 119 2° párrafo) violación -también llamado abuso sexual agravado por acceso carnal violento (art.119 3° párrafo) estupro (art. 120).

Delitos sexuales Primer Objeto de estudio: LA VÍCTIMA, el acto delictivo se realizó sobre ella y sólo sobre ella se puede probar sobre ella.

Determinación de presencia de semen De relevante importancia el informe médico sobre la víctima, ya que la sola presencia de semen en la misma o en los objetos secuestrados en la causa no demuestra el delito, sino tan sólo la realización del acto. Así como la ausencia del indicio buscado no descarta la violencia, el abuso deshonesto o el acceso carnal, sino la falta de eyaculación por parte del autor.

SE REQUIERE INMEDIATEZ ENTRE EL HECHO, LA DENUNCIA, Y LA REVISACIÓN MÉDICA DE LA VÍCTIMA

EN EL LABORATORIO

ANÁLISIS DE INTERÉS EN DELITOS SEXUALES: Determinación de la Presencia de Semen Manchas de Sangre Drogas de Abuso Estudios Genéticos

TIPOS DE MUESTRAS : Hisopados vaginales , anales y orales. Ropas, telas. Pelos, uñas. Sangre. Hígado para estudio toxicológico.

El objetivo principal del examen biológico es detectar la presencia de semen en las muestras recogidas, como prueba de actividad sexual. El semen tiene dos fracciones: La porción celular o esperma (5% del volumen), y la porción líquida o plasma seminal (95% de volumen), el semen en conjunto es de aspecto lechoso, opalescente, ligeramente amarillo, posee un ph. de 7.2‐7.3 y está compuesto por el plasma seminal y los espermatozoides que pueden ser separados por centrifugación. El rango de conteo normal de espermatozoides está entre 20 millones/ml y 200 millones/ml. El volumen se considera normal cuando es entre 2 y 6 ml.

Plasma Seminal BIOQUÍMICAS: Fructosa, ribosa, inositol, sorbitol, aa, aminas (colina, espermina y etanolamina) ANTIGÉNICAS: Albúmina, 2-3 alfaglobulinas, 2 betaglobulinas, 1 gammaglobulina. De los antígenos descriptos 4 son específicos. ENZIMÁTICAS: Fibrinolisina, aminooxidasa, F.A.P, F. Alcalina, 5- nucleotidasa. LÍPIDOS: Lecitinas y ácidos grasos MINERALES: Zn Y Ca

Recomendaciones para el análisis La persistencia de semen después de una supuesta agresión sexual varía entre víctimas y esta influenciada por las actividades que realiza la víctima después del hecho (ducha, higiene genital, otros). Evidentemente, constituye solo una evidencia en la investigación de agresión sexual. El semen se puede detectar en muestras vaginales tomadas hasta aproximadamente cuatro días después del coito; En la mayoría de los casos, sin embargo, no se detecta en muestras tomadas más allá de las 48 horas después del coito. La literatura refiere que se puede recuperar evidencia de semen hasta una semana después En el recto y la boca el semen se mantiene durante períodos mucho más cortos de tiempo. Por lo general, no se encuentra en hisopados anales después de 24 horas del supuesto incidente, pero las muestras se analizan hasta 72 horas después. En las muestras de cavidad oral se raramente después de las 6 horas del supuesto incidente. Sin embargo, se recomienda tomar hisopados de la cavidad oral hasta las 24 horas posteriores a la supuesta agresión sexual con sexo oral.

Sitios y tiempo límite para toma de muestra en la investigación de presencia de Semen Tiempo Limite Vagina 5 días Recto 2 días Boca 1 día Piel Puede persistir hasta el lavado Manchas secas en ropa Persiste hasta lavado

TOMA DE MUESTRA: Sobre la víctima : EXCLUSIVAMENTE POR UN MÉDICO.

1. Genitales Femeninos Se introduce un espéculo vaginal apropiado en los dos tercios inferiores de la vagina, se abre el espéculo y con dos hisopos secos se toman muestras del tercio superior de la vagina, incluyendo el fondo de saco posterior, los que se rotulan como “Hisopado vaginal superior”. Se debe evitar tocar el espéculo con el hisopo con el cual se esta tomando la muestra. Cuando sea relevante, debe tomarse también, muestras del orificio cervical externo,“Hisopado Orificio cervical externo”. Adicionalmente, puede tomarse una muestra, instilando de 2 a 10ml de suero fisiológico en la cavidad vaginal, y luego aspirando el contenido vaginal, a esta muestra se etiqueta como “lavado vaginal”. Cuando es imposible, la toma de muestra con espéculo (prepúberes, lesiones genitales,etc.), se realizará la toma de muestra insertando en la cavidad vaginal, secuencialmente, dos hisopos secos, teniendo cuidado en no tocar con el hisopo la región vulvar, a esta muestra se etiqueta como “hisopado vaginal”.

2. Cavidad oral Se recomienda la obtención de las muestras dentro de las 24 (veinticuatro) primeras horas posteriores al suceso sexual. Sin embargo se recomienda seguir la siguiente secuencia: Obtener 10ml de saliva como primera muestra. En seguida, se toma muestras con dos hisopos, aplicados de manera secuencial, se frotan sobre los márgenes interno y externo de las encías, sobre el paladar duro, el paladarblando, en el interior de las mejillas y labios, y sobre ambas superficies de la lengua. Debe ser rotulado como “hisopado bucal”. Finalmente la cavidad oral se enjuaga con 10ml de agua destilada. Debe ser rotulado como “lavado bucal”.

3. Región Anal Deben obtenerse dos muestras iniciales de la zona perianal, si la piel perianal está húmeda, la mancha debe ser recogida con gasas estériles o hisopos secos. Sino hay manchas o la mancha está seca, debe recogerse muestras utilizando la técnica del doble hisopado, esta muestra se rotula como “hisopado perianal” o“hisopado anal externo”. Luego se toman dos muestras del canal anal, se utiliza dos hisopos de manera secuencial, primero se pasa un hisopo húmedo, y luego un hisopo seco, los hisopos se introducen unos 3.0 cm dentro del canal anal. Esta muestra se rotulacomo “hisopado anal”.

Extendido Una vez realizado el hisopado de la región corporal correspondiente, se procederá al extendido del mismo en una lámina porta objeto estéril, para lo cual primero deberá etiquetar la lámina, posteriormente tomar el hisopo y deslizar el algodón del del mismo con movimientos rotatorios (girarlo) sobre la lamina; una lámina por cada hisopo. Luego, dejar secar ambos a temperatura ambiente, y colocarlos en su respectivo sobre de papel para remitir al laboratorio.

SE DEBEN REMITIR AL LABORATORIO COMO MÍNIMO DOS HISOPADOS DE CADA ZONA Y UN EXTENDIDO. UNO DE LOS HISOPADOS SE RESERVA PARA ESTUDIOS GENÉTICOS

Muestras sobre soportes absorbentes: prendas interiores, toallitas higiénicas, sábanas, toallas, etc. Deben remitirse enteros al laboratorio ,donde se realizará el levantamiento en forma adecuada. Las manchas húmedas deben ser secadas al aire antes de su embalaje.

Muestras sobre soportes no absorbentes: adquiere forma de película o escamas brillosas. Para distinguirlas se usa Luz UV. Cuando se encuentra sobre piso u otras artefactos se debe levantar con gasas, colocándolas sobre las manchas, y dejando gotear solución fisiológica presionándola con una pinza. Luego colocarla en un frasquito para su remisión. Si la mancha es seca se puede raspar con bisturí y colocada en un frasco.

Envío de muestras TODO DEBE ESTAR: PERFECTAMENTE ROTULADO CERRADO PRECINTADO O LACRADO Y EL SOBRE O CONSERVADORA DEBE CONTENER LAS FIRMAS DE QUIEN/ES ENVIA/N, QUIEN TRASLADA, y LA HORA DE SALIDA DE LA ESTAFETA Hisopos secos en tubos rotulados. Dentro de sobre de papel Muestras en soportes absorbentes secas en sobre de papel. Muestras tomadas en de soportes no absorbentes en frasco o sobre de papel según corresponda. Dividir según en que estudio se requiere: presencia de semen y/o estudio genético

Levantamiento de muestras en el laboratorio: SOBRE LAS MANCHAS EN TELAS : Visualización bajo luz de Wood (zona de fluorescencia característica) - Palpado con guantes de látex estériles. Delimitación con marcador - Corte de mancha en dos mitades, guardándose una de las mitades para posteriores estudios genéticos.

Pretratamiento de las muestras El hisopo o una fracción de la supuesta mancha de semen es macerada en unos ml de solución fisiológica y luego de centrifugado, con el líquido sobrenadante se determina FAP, SPA Y COMPONENTES DEL PLASMA SEMINAL y el culot se extiende sobre porta y cubre para mirar la presencia de ESPERMATOZOIDES por microscopia óptica ( en caso que no se haya remitido el extendido correspondiente)

Métodología de análisis El culot del tubo se procesará para microscopía óptica: Con tinción (Ej: May-Grunwald) Fresco - directo Al líquido del macerado: Electroforesis a Ph=3,9: separamos colina y espermina Se revelan con Dragendorff en CCD Pruebas enzimáticas colorimétricas: FAP Pruebas serológicas: PSA Estas pruebas no tienen sentido si ya se encontraron espermatozoides intactos por microscopía

Observación por MO Se realiza por observación microscópica directa o con una coloración adecuada. La presencia de un espermatozoide completo es la prueba irrefutable de semen. Es muy común encontrar en las muestras fragmentos de espermatozoides, ya sean cabeza o cola, pero debido a la contaminación con la que generalmente se encuentran estos restos, muchas veces estos fragmentos pueden ser confundidos con esporas y bacterias. Hay laboratorios que establecen un VALOR DE CORTE PARA INFORMAR POSITIVO este análisis, lo cual es muy complicado ya que se trabaja con una muestra de tamaño totalmente arbitrario, y la sola presencia de la enzima buscada es reveladora de su origen.

No encontrar espermatozoides enteros no significa AUSENCIA DE SEMEN, puesto que existen casos de oligospermias (ej: en alcoholistas crónicos) o bien puede tratarse de manchas viejas o expuestas a condiciones extremas donde no queden estas células, pero si puede determinarse la PRESENCIA DE SEMEN aún cuando no se observen espermatozoides, por las reacciones antigénicas y de FAP.

Fosfatasa Ácida Prostática Producida por la próstata, tiene una concentración 400 veces mayor que en otros fluidos corporales. La FAP cataliza en medio ácido la hidrólisis del alfa naftil fosfato. El alfa naftol producido, reacciona con una sal de diazonio formando un cromógeno púrpura. Tiene una sensibilidad de 67%, sin embargo a las 48h su sensibilidad disminuye a 40%, puesto que a partir de las 14 horas desaparece progresivamente. Constituye una prueba presuntiva.

Metodología Visualización directa o espectrofotometría visible Se siembra en paralelo con testigos: positivo y negativo Se trabaja con el sobrenadante de la maceración de los hisopados. Se prepara una solución de Fast Blue B (reactivo de color) en el día. Se debe tener ácido tartárico diluido. El sustrato es alfa-naftil fosfato de sodio. Se divide en reactivo A y reactivo B. A uno se le agrega reactivo color y sustrato y a la otra mitad lo mismo más el agregado de ácido tartárico.

Interpretación de resultados POSITIVO: SI SE COLOREA EL QUE NO TIENE EL ÁC.TARTÁRICO Y NO SE COLOREA EL DEL ÁC.TARTÁRICO NEGATIVO: SI NINGUNO DE LOS 2 SE COLOREAN DUDOSO (O INVÁLIDO): SI DA COLOR EN AMBOS POCILLOS. LA FAP INHIBE SU ACTIVIDAD CON ÁCIDO TARTÁRICO

Antígeno Prostático Específico Glicoproteína producida por las células epiteliales prostáticas. Sólo esta presente en muy bajas concentraciones en algunos fluidos corporales como: orina, suero, leche materna y líquido amniótico Se utiliza como marcador para semen a través de inmunoensayo que ofrece un método alternativo rápido y fiable de detección de PSA. Tiene una sensibilidad de 99.4%, y a las 48h su sensibilidad disminuye a 96%, puesto que a partir de las 27 horas desaparece progresivamente. Es una prueba confirmatoria. Kit Comerciales

Otras técnicas Estudios de componentes del plasma seminal (espermina, colina, otros) por cromatografía en capa delgada . Semenogelina I y II: Son los principales componentes proteicos en el semen y se producen principalmente en las vesículas seminales. Representan la consistencia gelatinosa del semen recién eyaculado debido a interacciones a través de puentes disulfuro. La presencia de Semenogelina ha sido demostrada en músculo esquelético, colon, riñones, y la retina, así como en el carcinoma de pulmón. Su concentración es 10 veces más que el PSA (19 mg /mL – 1.92 mg/dL). La identificación de Semenogelina humana mediante la prueba de tira reactiva esta disponibles en la forma de la RSID‐semen test, con resultado en 10 minutos, con una sensibilidad y especificidad del 100% con resultados positivos hasta las 72 horas de hecho. Es una prueba confirmatoria.

Antígenos del sistema ABO Un alto porcentaje de individuos presenta antígenos del sistema ABO en otros líquidos biológicos además de la sangre, son denominados “secretores”. Se diferencian del material antigénico de los GR, porque no se hallan unidos en la membrana, son solubles en agua y son glicoproteínas. Este análisis en viable cuando víctima y victimario poseen diferente grupo, víctima preferentemente no secretora y agresor secretor. Se aconseja buscar los antígenos ABO en saliva previamente, tomando muestra de la mucosa bucal. Si la víctima es AB secretora, no será útil realizar el análisis del semen extraído de la misma. La determinación se realiza por el método absorción- elución.

ADN Utilidad como herramienta vinculante.

Determinación en muestras biológicas Este examen se realizará en todos los casos que se encuentre signología de un hecho reciente y a solicitud de la autoridad fiscal / judicial correspondiente, el cual contribuirá a identificar al probable agresor. Para el estudio, se utilizarán muestras biológicas obtenidas durante el examen, mediante el hisopado de cavidad vaginal, anal u oral, así como de otras regiones del cuerpo en donde se sospeche haya restos de las mismas; además se puede tomar la muestra de la ropa que se solicitó a (al) la agraviada (o).

Determinación en ropas Las prendas de vestir con manchas sospechosas (sangre fresca, semen u otros) debe procurarse que sequen perfectamente a la temperatura del ambiente (evitar la humedad y la contaminación microbiana), antes de empacarlas. Colocarla en un sobre, de preferencia que sea más grande que la prenda para evitar la posibilidad de dañar los elementos que deben servir de prueba. Las prendas de vestir, del presunto agresor y/o de la presunta víctima, deben ser empaquetadas en forma separada. Rotular el sobre especificando el tipo de muestra, describiendo las características de la prenda enviada.

Toma de muestra en casos de agresión sexual Dos tomas bucales mediante hisopos, pasando por debajo de la lengua, encías y dientes. Búsqueda de manchas de semen, saliva o mordeduras. Dos tomas cervicales, dos tomas vaginales, y una de genitales externos, con hisopos estériles limpiando cuello uterino, cavidad vaginal y la región vulvar. Lavado vagina, empleando 10 ml de suero fisiológico que se recogerá en tubo de plástico. Dos tomas anales, con hisopos estériles limpiando el conducto ano rectal y el margen anal. Ropas que portaba la víctima.

Empaquetado y conservación de las muestras Muestras secas enviar sin refrigeración. Muestras húmedas: Mantener refrigerada. Identificación de la muestra: Tipo, Procedencia y /o pertenencia, Nº de referencia. Custodia: Identificación y firma de la persona que recoge la muestra, fecha y hora. Empaquetado: emplear cajas de cartón o sobre de papel, cada muestra en recipiente precintado.

La prueba del ADN en la Justicia A partir del descubrimiento de las zonas variables en el ADN (microsatélites), y la posibilidad de emplearlas para las identificación humana, la certeza de los estudios de paternidad y de identificación de criminales se incrementó a más del 99,99%. Cada fragmento variable de ADN se denomina “marcador” y los métodos actuales incluyen 15 marcadores variables ubicados en cromosomas no sexuales y otros 12 a 17 ubicados en el cromosoma masculino. En los casos de identificación el resultado de todos los marcadores debe coincidir exactamente para que dos muestras, tales como una mancha en la escena del crimen y un hisopado bucal de un imputado, correspondan al mismo individuo. Este conjunto de resultados numéricos obtenidos para un individuo o para una muestra forense se denomina “patrón genético” y se detalla en el Informe pericial.

La única situación compleja, y que genera controversias, es aquella en que se observan mezclas de fluídos biológicos correspondientes a más de dos individuos.

Bibliografía -ASPECTOS Y TÉCNICAS DE EVALUACIÓN MÉDICO LEGALES EN MENORES / VÍCTIMAS DE DCLS”“Exámenes Complementarios de Laboratorio y Uso de la Tecnología Forense: Lámpara de Wood, Tonómetro, Colposcopio, Frontoluz, Registro fotográfico y/o video”- Instituto de Medicina Legal- República de Perú. MANUAL DE QUIMICA FORENSE- Caro Patricia M. LOS ANALISIS DE ADN EN LA JUSTICIA_ Gustavo A. Penacino