Seminario Espectrofotometría Química Biológica Seminario Espectrofotometría

Algunos conceptos previos …. Una radiación electromagnética tiene una naturaleza dual

Las moléculas tienen un estado energético que puede ser alterado por una radiación electromagnética Cada molécula tiene estados excitados que la distingue del resto de moléculas

Es un conjunto de técnicas analíticas cuali y cuantitativas Espectrofotometría Es un conjunto de técnicas analíticas cuali y cuantitativas Se basa en la interacción de las moléculas y las radiaciones electromagnéticas. La cantidad de luz absorbida por una sustancia a distintas l es como una huella digital y se llama espectro de absorción

Cualitativa Cuantitativa Espectrofotometría Cualitativa Cuantitativa Espectro de absorción La cantidad de radiación absorbida depende de la concentración

Espectro de Absorción Absorbancia B A A Longitud de onda (nm) l

Transmitancia y absorbancia Io = Ia + It Puedo cuantificar la luz transmitida (transmitancia) o la absorbida (absorbancia)

Transmitancia y absorbancia T = ( It / Io) x 100 Transmitancia A= - Log T Absorbancia A= log ( 100 / %T) …. empleamos la absorbancia

Absorbancia Ley de Lambert y Beer A= abc A: absorbancia a: absortividad específica de cada soluto b: distancia recorrida por el haz de luz en cm c: concentración de la solución

A= abc

Conc. Prob = (A Prob/A Patrón)(Conc. Patrón)

Espectrofotómetro

Parte práctica Objetivos: Aprender el uso del espectrofotómetro. Realizar espectro de absorción de sustancias puras: soluciones de azul de metileno. Realizar una curva de calibración para determinar la concentración de una muestra problema de azul de metileno

Pasos para determinar la concentración de una muestra problema Calibración del equipo Espectro de absorción l No cumple con la ley de LB Curva de calibración

Calibración del espectrofotómetro Prender el equipo y esperar 15 minutos para que los circuitos alcancen temperatura. Elegir la longitud de onda deseada con el selector. Verificar 0% de T. Se realiza en modo transmitancia y colocando un cuerpo negro

Espectro de absorción de solución de azul de metileno Se emplea para identificar una sustancia y para determinar la l a la cual la absorbancia es máxima Utilizar la solución de 5mg/l. Llevar a cero de absorbancia con agua destilada. Medir las absorbancias a distintas l

A l Espectro de Absorción l Absorbancia Max Longitud de onda (nm) 25 mM l Max A 5 mM Longitud de onda (nm) l

Curva de calibracion Curva de calibración A partir de la solución patrón de 5 mg/l realizar cinco diluciones: 1/2; 1/4; 1/5; 1/6; 1/8; 1/10; 1/15. Medir sus absorbancias y la de la muestra problema a la longitud de onda seleccionada Graficar absorbancia versus concentración. Determinar con la gráfica anterior la concentración de la muestra problema.

Curva de calibración