Cátedra de Biología Molecular Universidad del Salvador. Células Madre Cátedra de Biología Molecular Universidad del Salvador.

Trasplante de Celulas Madre Neurologicas. “SCN” Enfermedad de Alzheimer Tratamiento Trasplante de Celulas Madre Neurologicas. “SCN” Pre- tratadas Factor neurotrópico derivado del cerebro “BDNF”

Tratado con SCN + FNDC Control AD+ Tratado con SCN -Sometieron para testear las condiciones en aprender y su habilidad de recuperar la memoria mediante un “laberinto de agua”.

Materiales y métodos: Aislamiento y cultivo de celulas madre neurales (NSC) Ratones recién nacidos libres de antigeno especifico fueron alimentados

¿Cómo se aislaron y cultivaron las NSC? Se anestesiaron con una inyección hipodérmica de xilazina y ketamina Zona subventricular y el hipocampo (regiones con mayor actividad neurogénica) fueron separadas Los tejidos se trataron con papaína y mezcla ovomucoide a 37ºC durante 45 min La actividad de la papaína fue bloqueada agregando un volumen adicional de mezcla ovomucoide despues de la digestión

Luego el sedimento celular se centrifugo a 80 g durante 5 min Se resuspendió y fue cultivado en el medio de neuroesfera estándar con L-glutamina, factor de crecimiento epidérmico de 20 ng/ml y suplemento B-27 a 37ºC durante 4 días. Las neuroesferas se pasaron con tripsina al 0,05 % seguida de trituración mecánica.

Inmunohistoquímica los ratones de cada grupo fueron perfundidos con PBS seguido de 4% de PFA Los tejidos cerebrales se fijaron por en PFA durante 1-2 días y fueron tratados de forma secuencial con sacarosa del 15% al 30% crioseccionaron en muestras de 16 micrómetros

4) se bloqueó con BSA al 5% durante 1h y se lo lavó 3 veces con PBS 5) fue incubado con AC1 (anti NGFR p75) a 4°C durante la noche 6) se lo incubó con AC2 a 37°C durante 1h 7) se le agrego diaminobenzidina durante 5 min, y se lo observó al microscopio

Tinción de Acetilcolinesterasa(AChE) 1)Realización de 3 lavados de 1 minuto sobre el hipocampo con buffer de acetato 0,1 M 2)Incubación durante 30 min. con buffer de: -0,05% de yoduro de acetilamina -citrato de sodio 4 M -sulfato de cobre 3 M -ferricianuro de potasio 0,1 M -tampón de acetato 0,065 M

3) Lavado con una solución de: -Sulfuro de amonio al 1% x 3 minutos -Nitrato de sodio 0,1 M x 5 veces 4)Tinción con nitrato de plata x 2 min. 5) Selección azarosa de 5 fibras positivas para AChE en hipocampo CA1 para observación mediante microscopio

Resultados

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