I HISTOLOGIA GENERALIDADES

DEFINICION EL ESTUDIO DE LOS TEJIDOS REFERIDO AL ANALISIS DE LA COMPOSICION MICROSCOPICA Y LA RESPECTIVA FUNCION DEL MATERIAL BIOLOGICO

ASPECTOS HISTORICOS MARCELO MALPIGUI (1628-16994) SU FUNDADOR HOOKE EN 1665 HACE DESCUBRIMIENTOS EN TEJIDOS VEGETALES MICROSCOPIOS MEJORADOS EN 1830 TEORIA CELULAR EN 1838 SCHLEIDEN PARA EL REINO VEGETAL Y SCHWANN PARA EL REINO ANIMAL VIRCHOW (1821-1902) TEORIA OMNIS CELLULA E CELLULA III HISTOLOGIA GENERALIDADES

CLASIFICACION CONFORMACION POR MAS DE 250 TIPOS DE TEJIDOS TEJIDO EPITELIAL TEJIDO CONECTIVO TEJIDO MUSCULAR TEJIDO NERVIOSO

HISTOGENESIS ESTUDIA LA FORMACION DE TEJIDOS, DESDE CELULA NO DIFERENCIADAS DE UNA CAPA GERMINATIVA HASTA CELULAS DIFERENCIADAS DE UN TEJIDO PAG. 197

TEJIDO EPITELIAL CAPAS QUE RECUBREN EL EXTERIOR DEL ORGANISMO Y SUS CAPAS INTERNAS CELULAS MUY CERCANAS CARECEN DE VASOS SANGUINEOS

TEJIDO EPITELIAL SE ORIGINA DE LAS 3 CAPAS GERMINATIVAS DEL ECTODERMO SE DESARROLLA LA EPIDERMIS DEL ENDODERMO LA CAPA INTERNA DE ESTOMAGO E INTESTINO DEL MESODERMO LAS MEMBRANAS INTERNAS QUE CUBREN CAVIDADES INTERNAS CARDIACA PULMONAR Y ABDOMINAL (MESOTELIO)

TEJIDO CONECTIVO DERIVA DEL MESODERMO CONTIENE GRAN MATRIZ EXTRACELULAR VASCULARIZADOS GLANDULAS CON PARTICIPACION ENDOTELIAL MESENQUIMA

TEJIDO MUSCULAR DERIVAN DEL MESODERMO CADA CAPA MUSCULAR ESTA RODEADA POR DELGADA CAPA DE TEJIDO CONECTIVO MUY VASCULARIZADO

TEJIDO NERVIOSO DE ORIGEN ECTODERMICO NUERONAS Y CELULAS GLIALES TUBO NEURAL GANGLIOS ESPINALES TEJIDO CONECTIVO RODEA A FIBRAS NERVIOSAS

OBTENCION DE PREPARACIONES HISTOLOGICAS PERMANENTES (LAMINAS) PARA EL ESTUDIO AL MICROSCOPIO

PREPARACION DE CORTES PARA MO Deben efectuarse en forma inmediata a la obtención del tejido vivo Preparación en acciones químicas y cortes histológicas Se pretende conservar el aspecto más real al tejido vivo

OBTENCION DE LA MUESTRA Generalmente se obtiene la muestra de un animal anestesiado o inmediatamente después de su muerte Dificultades de lograrlo en el material humano La cirugía representa la mayor fuente de material humano ya que cuando de extirpa algo lo acompaña tejido sano junto a tejido enfermo

FIJACION Tiene como objetivo preservar la muestra conservando el protoplasma con la menor alteración de tejido vivo Evitar la autólisis por enzimas protoplásmicas Coagulan el protoplasma para hacerlo insoluble y enduren el tejido para el corte Se estabilizan las proteínas porque los fijadores favorecen los enlaces cruzados

FIJADORES Formaldehído al 10% Glutaraldehído al 3% Tetróxido de osmio Alcohol Bicloruro e mercurio Algunos ácidos (pícrico, acético, ósmico) Mezclas: líquido de Bouin (ac. Pícrico, formalina y ac. acético); Zenker (formalina, bicromato de potasio y bicloruro de mercurio)

FIJACION FIJACION POR INMERSION Muestra de tejidos obtenidos por diversos métodos FIJACION POR PERFUSIÓN Solo posible en animales de experimentación

DESHIDRATACION / ACLARAMIENTO Procedimiento necesario para la inclusión en parafina y pasarlo a corte Se pasa el tejido por una serie de soluciones acuosas de etanol en concentraciones crecientes hasta llegar al anhidro El tejido deshidratado se sumerge en un líquido miscible en etanol y parafina que disuelve el xileno y penetra así en el tejido

TECNICAS DE INCLUSION DE PARAFINA Posterior al aclaramiento, se coloca el tejido en parafina líquida Al enfriar se solidifica la parafina y forma junto con el tejido incluido un bloque o “taco” que pasa al seccionado

CORTE MICROTOMO El tejido fijado se corta en secciones delgadas que permiten el paso de luz La mayoría de los preparados para MO tienen un espesor de 3-5 a 10 µm por lo que se requiere de “microtomo” Cortes en forma de cubo 10

TINCIONES PREPARACION. Cada corte se pasa a un portaobjeto limpio al que se le ha extendido albúmina con huevo Se hace correr agua por debajo del corte y se coloca el portaobjetos en una platina caliente El agua se evapora y el corte queda colocado sobre el vidrio a la que queda adherido, listo para teñirse

TINCIONES Tiene como propósito destacar el contraste natural de los componentes celulares y tisulares, así como el material extrínseco La mayor parte de los colorantes se emplean en solución acuosa y por ende se requiere retirar la parafina con solventes (xilol o toluol) y pasos decrecientes de alcohol antes de su tinción Secado de la muestra y se coloca una gota de medio de montaje (bálsamo de Canadá, con índice de refracción semejante al vidrio) Se cubre con cubre objeto, se deja secar y lista

COLORACION HEMATOXILINA EOSINA (HE) Método de coloración mas comúnmente empleado Tiñe los componentes nucleares de azul violáceo mientras que los componentes citoplasmáticos adquieren una tonalidad rosada Logra hacer distinguir muy bien la forma y estructura del núcleo y la forma y extensión de la célula

MICROSCOPIO OPTICO

MICROSCOPIO DE LUZ Parte mecánica Sirve de soporte Condensador Parte óptica Objetivo Ocular

MICROSCOPIO ELECTRONICO

MICROSCOPIO ELECTRONICO Un microscopio electrónico es aquel que utiliza electrones en lugar de fotones o luz visible para formar imágenes de objetos diminutos. Los microscopios electrónicos permiten alcanzar amplificaciones mayores antes que los mejores microscopios ópticos, debido a que la longitud de onda de los electrones es bastante menor que la de los fotones "visibles". El primer microscopio electrónico fue diseñado por Ernst Ruska y Max Knoll entre 1925 y 1932 Incrementa el poder de resolución del MO Se reemplaza la luz visible de longitud de onda de 500 nm por un haz de electrones del orden de 0.005 nm Los electrones no atraviesan las lentes del vidrio por lo que se sustituye por bobinas electromagnéticas

DIBUJO ESQUEMATICO COMPARATIVO DE MICROSCOPIOS

MICROSCOPIO ELECTRONICO Disponen de un cañón que emite electrones chocan y atraviesan el objeto Se calienta un cátodo filamentoso de tugsteno (filamento) en atmósfera al vacío Sistema que registra o muestra la imagen que producen los electrones

TIPOS DE ME MICROSCOPIO ELECTRONICO DE TRANSMISION (TEM) Transmission Electron Microscope MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO (SEM) Scanning Electron Microscope Dirige un haz de electrones hacia el objeto que se desee examinar, parte rebotan, son absorbidos y otros lo atraviesan formando la imagen el especímen Emplea cortes muy finos no mas de 2,000 Å Se coloca una placa fotográfica o pantalla fluorescente detrás del objeto para aumentar la imagen Pueden aumentar la imagen hasta un millón de veces

MICROSCOPIO ELECT. DE BARRIDO En el microscopio electrónico de barrido (MEB) la muestra es recubierta con una capa de metal delgado, y es barrida con electrones enviados desde un cañón. Un detector mide la cantidad de electrones enviados que arroja la intensidad de la zona de muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones, proyectados en una imagen de TV. Su resolución está entre 3 y 20 nm, dependiendo del microscopio. Permite obtener imágenes de gran resolución en materiales pétreos, metálicos y orgánicos. La luz se sustituye por un haz de electrones, las lentes por electroimanes y las muestras se hacen conductoras metalizando su superficie.

COMPONENTES DEL MICROSCOPIO ELECTRONICO Filamento de tugsteno (cátodo) que emite electrones Condensador o lente electromagnética que concentra el haz de electrones Objetivo o lente electromagnética que amplia el cono de proyección del haz de luz Ocular o lente electromagnética que aumenta la imagen Proyector o lente proyectora que amplia la imagen Pantalla fluorescente, que recoge la imagen para hacerla visible

EXAMEN E INTERPRETACION DE LOS CORTES La habilidad de interpretación debe desarrollarse con la práctica Util tener guía comparativa con rotulaciones de tejidos observados Observar el corte contra la luz a simple vista y con la práctica podrá obtenerse una orientación a que tejido pertenece

EXAMEN E INTERPRETACION DE LOS CORTES El campo visual que se obtiene con el objetivo de menor aumento es de unas 1,500 µm ó 1.5 mm de Ø Disminuye en proporción directa al aumento usado y con el objetivo en inmersión en aceite la zona visible del campo solo mide poco mas de 100 µm

EXAMEN E INTERPRETACION DE LOS CORTES Al estudio de cortes hace pensar en términos de dos dimensiones ya que por razones prácticas los cortes carecen de profundidad pero es importante y recomendable hacer una reconstrucción mental en tercera dimensión de células, tejidos y órganos y debe tenerse en cuenta el plano del corte

EXAMEN E INTERPRETACION DE LOS CORTES

EXAMEN E INTERPRETACION DE LOS CORTES Los tubos con vasos sanguíneos, conductos glandulares y genitales masculinos, se observan mejor en cortes transversales Las estructuras muertas se examinan con propósito de dar una idea de su estado durante la vida que tienen cambios dinámicos