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HOSPITAL MONTE NARANCO DESARROLLO DE UNA PRUEBA RÁPIDA PARA EL DIAGNÓSTICO DE LAS INFECCIONES OCULARES (2010-2011) HOSPITAL MONTE NARANCO

Hospital Monte Naranco DESARROLLO DE UN SISTEMA PARA EL DIAGNÓSTICO MOLECULAR DE LA QUERATITIS INFECCIOSA Diciembre 2009 - Diciembre 2010 Hospital Monte Naranco

MICROORGANISMOS PRESENTES EN MUESTRAS OCULARES AMEBAS: Acanthamoeba HONGOS: Candida Aspergillus Fusarium BACTERIAS: Staphylococcus Pseudomonas aeruginosa Streptococcus pneumoniae Propionibacterium acnes Acinetobacter Corynebacterium Enterobacterias VIRUS: Adenovirus Herpes simple Citomegalovirus Papiloma Virus Varicela Zoster

EXTRACCIÓN DE ADN DE MUESTRAS OCULARES + Extracción 1h 30 min 106μm ADN Vortex 10 minutos 3 horas en DTT + pronasa a 56oC BIOPSIAS

AMPLIFICACIÓN DE ADN MEDIANTE PCR CONVENCIONAL ADN DIANA rDNA: 18S, 16S

AMPLIFICACIÓN DE ADN MEDIANTE PCR ADN DIANA rDNA: 18S, 16S PCR- RFLP PCR

AMPLIFICACIÓN DE ADN MEDIANTE PCR ADN DIANA mRNA: 18S, 16S VENTAJAS: La amplificación de cualquier microorganismo presente en la muestra en uno o dos tubos con pocos primers. Incremento de la eficiencia. INCONVENIENTES: Prácticamente cualquier material utilizado puede tener restos de ADN Los enzimas utilizados durante la extracción/amplificación tienen restos de ADN

PCR A TIEMPO REAL O PCR CUANTITATIVA 1.- DETECCIÓN MEDIANTE SYBR Green I

PCR A TIEMPO REAL O PCR CUANTITATIVA 1.- DETECCIÓN MEDIANTE SYBR Green I

PCR A TIEMPO REAL O PCR CUANTITATIVA 1.- DETECCIÓN MEDIANTE SYBR Green I VENTAJAS: No se necesita diseñar sondas especificas y es mucho más barato INCONVENIENTES: Si el amplicón es pequeño es difícil distinguir el pico perteneciente al amplicón de otros que pueden aparecer por formación de dímeros de los primers

PCR A TIEMPO REAL O PCR CUANTITATIVA 2.- DETECCIÓN MEDIANTE SONDAS Taqman

PCR A TIEMPO REAL O PCR CUANTITATIVA 2.- DETECCIÓN MEDIANTE SONDAS Taqman

PCR A TIEMPO REAL O PCR CUANTITATIVA 2.- DETECCIÓN MEDIANTE SONDAS Taqman VENTAJAS: Es mucho más específico INCONVENIENTES: Es necesario el diseño de sondas específicas para el microorganismo y es mucho más caro.

FORMULARIO PARA LA PETICIÓN DE PRUEBAS

KIT PARA LA RECOGIDA DE MUESTRAS OCULARES

Proyectos de I+D+i DIAGNÓSTICO DE LAS INFECCIONES OCULARES Diagnóstico en tiempo real de la queratitis infecciosa