Microscopía de Contraste de Fases. USOS: es de un valor incalculable para el estudio de células vivas, en el exámen de preparaciones húmedas y de gota pendiente. JUSTIFICACIÓN: con la iluminación normal, resulta muy difícil el estudio de preparaciones de densidad homogénea y transparentes como bacterias y células cuya capacidad de absorción de la luz es tan pequeña que la imagen no presenta diferencias de luminosidad entre sus elementos . Estas diferencias de absorción de la luz y su trayectoria en las células y el medio externo, retrasan y desvían las ondas luminosas que atraviesan la célula. El microscopio de Contraste de Fase pone de manifiesto estas pequeñas diferencias en las células, sus estructuras y su medio externo, las cuales no son discernibles por otros métodos ópticos.

Diferencias entre Microscopio Optico Convencional y Microscopio de Contraste de Fases El Microscopio de Contraste de Fases Contiene: Diafragma anular en el Condensador que consta de un anillo transparente con la parte central oscurecida y que forma un cono de luz hueco como el del microscopio de campo oscuro. Placa de Difracción ó Placa de Fase dentro del tubo del sistema de lentes objetivos, la cual consta de un anillo ranurado a manera de disco. Ocular similar al del microscopio de campo claro.

Diafragma Anular del Condensador y Anillo de Fase ó Placa de Difracción Lente del Condensador Oscurecida en el Centro

Funciones del Condensador Cuenta con un dispositivo similar al del campo oscuro que forma un cono de luz hueco en el centro.Su sistema óptico descompone la luz en dos partes: Luz que llega a velocidad normal al ocular Luz que llega retrasada ¼ de longitud de onda respecto a la primera. Para lograr dicho retardo, se necesita un objetivo especial.

Funciones del Objetivo Contiene en su interior, una Placa de Fase ó Placa de Difracción que es un anillo ranurado a manera de disco dentro del tubo del sistema de lentes objetivos, el cual es un disco de vidrio óptico, recubierto con una fina capa metálica para absorber la luz, así como con una capa de material dieléctrico, que retarda la luz. Así, la luz que pasa por el exterior del anillo ( luz desviada ) se retrasa ¼ de longitud de onda con respecto a la que pasa por su interior ( luz no desviada ).

Cono de Luz que Incide sobre el Objetivo en Microscopio Óptico

Trayectoria que Sigue la Luz en el Microscopio de Contraste De fases.

Mecanismo de Función del Microscopio de Contraste de Fases. En las células y en las bacterias existen pequeñas diferencias ópticas debido a sus densidades apenas diferentes y las consiguientes diferencias de absorción de la luz y con respecto a su medio exterior. Estas diferencias de densidades ( y de absorción y trayectoria de la luz ) de las células, su medio interno y su medio externo, retrasan y desvían las ondas luminosas que atraviesan la célula.

Mecanismo de Función del Microscopio de Contraste de Fases. La luz proveniente de la muestra es descompuesta por el condensador en 2 partes: los rayos no desviados que llegan con velocidad normal al ocular y los rayos desviados y retrasados ¼ de long. de onda con respecto a los primeros Al pasar por el objetivo, el anillo de fase que se encuentra dentro de él hace que la luz que pasa por su exterior ( luz desviada ) , se retrase ¼ con respecto a la que pasa por el interior ( luz no desviada Ambos componentes de la luz siguen su curso normal y llegan al ocular, pero uno de los rayos ( luz desviada que pasó por el exterior del anillo ) llega atrasado, retardándose en total ½ de long. de onda.( ¼ del condensador y ¼ del anillo de fase ). Así, se forman 2 haces de luz, uno retrasado en su long. de onda con respecto al otro. El ojo humano distingue así el objeto a observar oscurecido sobre un fondo brillante.

Ocular de AMICI-Bertrand