Medios de cultivo Componentes básicos: Agua Son preparaciones a partir de compuestos naturales modificados, diseñadas para cultivar microorganismos en el laboratorio. Componentes básicos: Agua Fuente de C (H de C – glucosa, sacarosa, lactosa, almidón, etc.) Fuente de N (proteínas, peptonas, aminoácidos) Fuente de S, P, Ca, Na, Fe, (sales) Vitaminas y otros factores de crecimiento (extracto de levadura, extracto de carne, etc.) Pueden ser: Líquidos Sólidos Semisólidos Agente solidificante: AGAR-AGAR (polímero extraído de algas)

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO SEGÚN SUS COMPONENTES Naturales: aquellos que existen como tal en la naturaleza ( leche, suero, sangre, agua, etc.). Son siempre complejos. Artificiales: se preparan a partir de diversos componentes; pueden ser: Sintéticos o químicamente definidos: Se preparan con sustancias puras y en cantidades conocidas. Complejos o químicamente indefinidos: Se preparan con ingredientes cuya composición se conoce sólo de forma aproximada, por ser sustancias complejas (suero, sangre, extracto de levadura, extracto de carne, peptonas, etc.)

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO SEGÚN SU FINALIDAD Comunes o generales: aquellos que se utilizan para el cultivo de un amplio rango de bacterias (u hongos) Pueden ser sólidos o líquidos, para aislamiento no selectivo o mantenimiento, etc. Especiales: Enriquecidos: Son medios comunes adicionados de sangre, suero, yema de huevo, etc. para el cultivo de m.o. nutricionalmente exigentes. Selectivos Para enriquecimiento: medios líquidos que permiten el crecimiento de varios m.o. de una muestra, pero favorecen a alguno que está en muy baja proporción Para aislamiento: medios sólidos que contienen algún componente que favorece el desarrollo de un grupo, inhibiendo a otro. Diferenciales: contienen algún componente que permite distinguir entre 2 o más tipos de m.o. por carácter{isticas diferenciales de crecimiento (ej. Color de la colonia)

Aumento del tamaño (y biomasa) celular CRECIMIENTO MICROBIANO Aumento del tamaño (y biomasa) celular Es imposible medirlo en una sola célula Es limitado, no nos da ninguna Aumento del n° de células y/o aumento de biomasa de una población celular Las bacterias se dividen por fisión binaria, y el crecimiento de la población es exponencial

División por fisión binaria en bacterias

CURVA DE CRECIMIENTO CURVA DE CRECIMIENTO

FASES DE CRECIMIENTO: Latencia : La fase de latencia dura aproximadamente 4 hrs. No hay crecimiento visible y de hecho puede haber una reducción en el número de bacterias. Es un período de adaptación, en que las bacterias tienen una gran actividad metabólica, pero no se dividen. Logarítmica : Después de 6 hrs, aproximadamente, de haber sembrado las bacterias en un medio óptimo, las bacterias comienzan a dividirse en forma constante y máxima. El número de bacterias aumenta en progresión geométrica y la resultante es una línea recta ascendente. Este período termina más o menos a las 12 hrs, debido a la disminución de los nutrientes disponibles. Estacionaria : Debido a la acumulación de desechos metabólicos y disminución de los nutrientes, la actividad metabólica decae. Las bacterias se dividen con menor frecuencia y el número total de bacterias vivas permanece constante, puesto que el número de muertes se equilibra con el de multiplicación. En la mayoría de las bacterias esta fase se produce entre las 18 a 24 hrs. Regresión : En esta fase, conocida también como fase de muerte, las bacterias dejan de multiplicarse y mueren con el tiempo, debido al término de nutrientes, acumulación de material de desecho y disminución del espacio físico. No todas las bacterias del cultivo se encuentran en esta fase al mismo tiempo, por lo tanto se representa como una pendiente, que no llega a 0.

E. coli a 37 °C en condiciones óptimas se duplica cada 20 min. Al inicio -------------------- 10.000 células A los 20 min. ------------ 20.000 células A los 40 min. ------------ 40.000 células A 18 hs. -------------------- ???? Organismo Temp. (°C) Tiempo de duplicación (hs) BACTERIAS Escherichia coli 37 0,28 Bacillus subtilis 40 0,43 Pseudomonas putida 30 0,75 Mycobacterium tuberculosis 6 Treponema pallidum 34 LEVADURAS Saccahromyces cerevisiae 25 2

Tiempo de Generación : G Es el tiempo requerido para que una célula se divida o una población se duplique G = t n n = Numero de generaciones trascurridas t = Tiempo Na = Número de células iníciales Nb = Numero de células a tiempo b Nb = 2 n Na lg Nb = n lg 2 + lg Na

n = lg Nb – lg Na G = t 3,3 lg Nb/Na lg 2 n = 3,3 lg Nb Na El tiempo de Generación de E. coli es de 20 minutos y el Levadura S. cereviciae 90 minutos. A partir de un número dado de células se puede determinar a un tiempo t en número de células probables.

Tipos de Cultivos: Estacionario (Batch) Semicontinuo Continuo

Determinación de Crecimiento Microbiano Métodos Directos - Recuneto del número de célula en cámara de Nebauer - Peso seco celular - Determinación de Nitrógeno o Proteínas totales - Determinación del DNA Métodos Indirectos - Recuento de Colonías en Placas - Recuento sobre filtro de membranas - Consumo de Oxigeno - Liberación de CO2 - Medida de Turbidez - Tubos Convinatorios