UNIVERSIDAD CATÓLICA DE CUENCA Pruebas diagnosticas de cocos Gram positivos y Gram negativos Integrantes: Stefany Morales Karen Montalván

Colonias de Staphylococcus colonias en agar sangre: Medianas Redondas, Lisas brillantes Miden de 1 a 3 mm en 24 h

S.Aureus S.epidermidis Colonias grises a dorada - colonias grises a blancas

Prueba de la catalasa determinar la enzima de la catalasa descompone el peróxido de hidrogeno en agua y oxigeno. Procedimiento 1.Con el asa de siembra, recoger el centro de una colonia pura (18 a 24 horas) y colocarla sobre un portaobjetos limpio. 2. Agregar una gota H2O2 al 3%. 3.Observar la efervescencia –Control positivo: S. aureus. –Control negativo: Streptococcusspp

Prueba de la coagulasa Coagulasa enzima producida por S.Aures Procedimiento 1.- en un tubo de ensayo de vidrio esterilizado. 2.- agregar 0.5 ml de un cultivo en caldo puro de 8 a 24 h, recoger con el asa una buena colonia para de na placa de agar. 3.-hacer girar el tubo suavemente para lograr la suspensión del organismo( no agitar) 4.-Incubar la mezcla a 35–37 °C (en baño maría de preferencia)por 4 horas; observar si hay formación de coágulo inclinando lentamente el tubo.

Sensibilidad a la Novobiocina Se basa en la resistencia que presentan algunas especies del género Staphylococcus a la novobiocina. Procedimiento: Se siembra mediante agotamiento de estrias en placa de agar sangre. En la zona donde se ha realizado la primera descarga se coloca el disco de novobiocina, se deja incubar 24h a 37ºC Resultado: El microorganismo presenta resistencia a la novobiocina ya que no hay halo de inhibición.

DNAsa Estudia la capacidad que tienen algunas bacterias para producir la enzima DNAsa, que produce la degradación del DNA que contiene el medio de cultivo. Procedimiento: En la placa se siembra la muestra haciendo una estría de unos 2cm, se incuba 24h a 37ºC y se hace la lectura añadiendo HCl Resultado: En mi caso no aparece aclaramiento alrededor de la estría por lo que la prueba es negativa.

PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN DE COCOS GRAM NEGATIVOS

OXIDASA Se basa en la capacidad que tienen algunos microorganismos, aerobios o anaerobios facultativos, de producir una enzima “citocromo oxidasa”, que cataliza, en la cadena respiratoria, la transferencia de electrones desde el sustrato orgánico hasta el oxígeno.

OXIDASA Procedimiento: Colocar un trozo de papel de filtro en un porta. Agregar 2-3 gotas de Reactivo de Kovacs en el centro del papel de filtro. Coger una colonia con el asa de platino y extender sobre el reactivo puesto anteriormente sobre el papel de filtro.

OXIDASA Obtención de resultados: La prueba da positivo al aparecer de inmediato un color violeta en la zona del papel de filtro donde estamos depositando la muestra (NEISSERIAS)

FERMENTACIÓN DE AZÚCARES Las bacterias aerobias y anaerobias facultativas fermentan los carbohidratos produciendo ácidos orgánicos y gas los cuales pueden detectarse mediante un indicador de PH y un tubo de ensayo. Detectar si la bacteria fermenta la carbohidratos y si produce gases. En este caso ambas muestras han virado de color a amarillo por lo que se considera fermentador de carbohidratos, en cambio en cuanto a la producción de gases observamos como en el tubo de la izquierda se ha producido producción de gases y en el de la derecha no.

FERMENTACIÓN DE AZÚCARES Procedimiento: Preparación de caldo de azúcares y nitrato: se prepara mezclando 300mL de Agua destilada y 4,5 gramos de glucosa y repartir en tubos. Inocular una colonia en el medio líquido (medio base para caldo rojo fenol) que contenga peptonas, un indicador de pH y una fuente de Ca fermentable. Se coloca dentro el tubo de ensayo Se incuba 24h a 37ºC

BETA GALACTOSIDASA (ONPG) El sustrato artificial ortonitrofenil galactósido al ser hidrolizado por la B-galactosidasa origina un compuesto de color amarillo. Determinar la capacidad que presentan algunas bacterias, que poseen la enzima beta galactosidasa, para fermentar la lactosa originando glucosa y galactosa. Es útil para diferenciar a Nisseria lactámica de otras especies de Nisseria. También permite diferenciar a enterobacterias como E.coli, Klebsiella, Aerobacter y Enterobacter, que dan positiva en la prueba resultado fue positivo

BETA GALACTOSIDASA (ONPG) Procedimiento: Con pinzas estériles, se deposita un disco en un tubo de ensayo con 1mL de NaCl esteril. Con asa se inocula una colonia y se incuba 24h a 37ºC