Secuenciación Dra. María Isabel Fonseca
Secuenciación El análisis más detallado de la estructura del ADN consiste en averiguar la secuencia de nucleótidos.
Secuenciación Procedencia de las Muestras – Clonación – PCR – Fragmentos procedentes de digestión – Bandas recortadas a partir de geles
Método químico de secuenciación del ADN: Maxam y Gilbert Se basa en la hidrólisis química Se aplica a secuencias de ADN de menos de 250 nt Posee tres etapas – marcaje del ADN – Hidrólisis química selectiva del ADN – Análisis de los productos
Método químico de secuenciación del ADN: Maxam y Gilbert
Método enzimático de secuenciación del ADN: Sanger El ADN molde o segmento de ADN que se desea secuenciar. Un enzima que replique el ADN, normalmente la ADN Polimerasa I del bacteriofago T4. Un cebador o "primer" Los cuatro nucleótidos trifosfato (dATP, dCTP, dGTP y dTTP). A veces en vez de marcar radiactivamente el cebador, se marca radiactivamente uno de los cuatro nucleótidos trifosfato en cada reacción. Por último, se necesitan nucleótidos didesoxi (ddATP, ddTTP, ddCTP y ddGTP). Componentes
Método enzimático de secuenciación del ADN: Sanger
didesoxirribonucleótido EJ: didesoxiciticina- trifosfato (ddCTP) desoxirribonucleótido EJ: desoxiciticina- trifosfato (dCTP) Método enzimático de secuenciación del ADN: Sanger
Secuenciacion: Método enzimático
Secuenciación automática
Resolver Método de secuenciación: Maxam y Gilbert Describir la secuencia que se deduce a partir del gel G A+G C+T C
Respuesta G A+G C+T C ATCTGACCCTAGTCCATCTGACCCTAGTCC
Resolver Método de secuenciación: Sanger Describir la secuencia de la hebra molde Describir la secuencia que se deduce a partir del gel
Respuesta