HEMOCULTIVO Un hemocultivo es un cultivo microbiológico de la sangre Es un método diagnóstico en medicina empleado para detectar infecciones que se trasmiten a través de torrente sanguíneo bacteriemia o septicemias.

OBTENCION DE MUESTRA Desinfecte el tapón de caucho del frasco de hemocultivos con alcohol etílico al 70%. No utilice solución de yodo para limpiar el caucho. Asépticamente desinfecte el sitio de la venopunción con alcohol etílico al 70% y luego con una preparación de yodo en círculos concéntricos hacia fuera del sitio elegido. Espere que el yodo seque y realice la punción sin palpar de nuevo. Coleccione la muestra de sangre a razón de 0.5 – 2 ml para niños y 5-10 ml para adultos en cada frasco. El volumen de sangre a cultivar es el factor más importante en la recuperación del microorganismo. Cada frasco debe ser servido con una punción diferente en diferentes tiempos, a menos que utilice a la vez frascos para organismos aeróbicos y anaeróbicos. Nunca llenar todos los frascos con sangre provenientes de una sola punción. No tomar sangre del catéter, a menos que se esté realizando un estudio epidemiológico.

La cantidad de sangre a extraer estará dada de acuerdo al frasco a utilizar. Hemocultivo Pediátrico 1 a 2 ml de sangre Hemocultivo Adulto 5 ml de sangre Hemocultivo Neonatal 0,5 a 1 ml de sangre Hemocultivo 100 10 ml de sangre

CLACIFICACION DE HEMOCULTIVO SEGÚN PACIENTES Y METODOLOGIA CLASIFICACION DE LOS HEMOCULTIVOS según tipo de paciente según toma de la muestra Según tipo de microorganismo Según metodologia pediátrico centrales Bacterias aeróbios Manuales adulto perifericos Bacterias anaeróbicas Semi- automatizada inmunocompetente Automatizados Micobacterias inmunosuprimidos Hongos

Inoculación de los frascos Una vez realizada la extracción de la sangre y la desinfección del tapón de goma, se inocula la sangre, sin introducir aire, y se hace rotar el frasco, por inversión.

Sistemas manuales versus automatizados Inoculación de la muestra (10 ml) Botella con medio de cultivo (aerobio – anaerobio) Detección visual del desarrollo microbiano ( 1 vez al día por 7 días: turbidez, hemolisis, gas, velo) Tinción de Gram Resiembra Resiembra ciega A las 24 hrs. Y 7 dias

Hemocultivos automatizados Inoculación de la muestra ( 10 ml ) Botella con medio de cultivo ( aerobios, anaerobios, micobacterias, resinas ) COMPUTADOR: Índice de crecimiento Gráfico de crecimiento Descarga de botella Tinción de Gram-resiembra Eliminación de botellas (sin cultivo)

Incubación de los frascos Los mismos deberán incubarse a 35-37ºC por lo menos durante una semana. En algunos casos de deberán incubar hasta 14 días (Haemophilus, Neisserias, levaduras).

Observación de los frascos Los frascos se deberán observar cada 24 a 48 hs. Durante el tiempo que dure la incubación. Observar cualquier cambio de color, aumento de turbidez, presencia de burbujas, etc.

OBSERVACIÓN MACROSCÓPICA Hemólisis Streptococcus, Staphylococcus, Listeria spp. Clostridium, Bacillus spp.   Turbidez Bacilo gramnegativo aerobio, Staphylococcus, Bacteroides spp. Formación de gas Bacilo gramnegativo aerobio, anaerobios Formación de velo Pseudomonas spp., Bacillus spp., levaduras Coágulo Staphylococcus aureus Colonias visibles (puntiformes) Staphylococcus, Streptococcus

SELECCIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO DEPENDIENDO DE LA TINCIÓN DE GRAM Gram AS Ch Mac CAN Ana Bruc ---------------------------------------------------------------------------------------- Coco grampositivo x x x x Bacilo grampositivo x x x x Coco gramnegativo x x x x x Bacilo gramnegativo x x x x * AS=agar sangre; Ch=agar chocolate, Mac= agar Mac Conkey, CNA= agar Columbia-colistin-ácido nalidixico, Ana=agar anaerobio, Bruc=Agar Brucella.  

Subcultivos Se deberán realizar subcultivos cada 24hs. Para ello se desinfectara el tapón de goma del frasco y se retirara, 0,25 a 0,5 ml de medio, con aguja y jeringa esteriles. Con el material extraído se realizarán cultivos en agar sangre y/o chocolate, además de una coloración de gram o naranja de acridina. Las placas sembradas se deberán incubar también con presencia de CO2 (Vela) y en estricta anaerobiosis (jarras).

Interpretación de los resultados Siempre es necesario obtener el mismo germen en dos o más muestras para considerarlo Positivo, salvo en algunos casos donde el microorganismo recuperado (en una sola muestra) no se trate de un organismo presente en la flora habitual de piel, entonces podrá considerarse como posible agentes causales.

La presencia de gérmenes en la coloración no siempre debe considerarse como provenientes del cultivo ya que existen posibilidades de contaminación con organismos ambientales. Si en la coloración de una o más muestras, se observa la presencia de organismos y en los cultivos sin CO2 o con "vela" no hay desarrollo, habrá que prestarle mucha atención al cultivo con anaerobiosis total (Jarra).

El hemocultivo se utiliza para el diagnóstico de endocarditis infecciosa Las bacterias que más frecuentemente se aíslan son: St. aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Neisseria gonorrhoeae, Estreptococos del grupo viridans. La EI se produce principalmente en los drogadictos endovenosos, en pacientes con reemplazos valvulares, en la bacteriemia hospitalaria y en los mayores de 60 años.

Los gérmenes mas frecuentemente aislados Streptococcus spp 60-80 % Estreptococos grupo viridans 30-40 % Enterococcus spp 5-18 % Otros estreptococos 15-25 % Staphylococcus spp 20-35 % Estafilococos coagulasa positivos 10-27 % Estafilococos coagulasa negativos 1-3 % Bacilos aerobios Gram negativos 1.5-13 % Hongos 2-4 % Otros gérmenes <5 % Infecciones mixtas 1-2 % Cultivo negativo 2.5-31 %

Utilidad clínica Hemocultivo sirve para: · Confirma la sospecha clínica de la presencia de un foco infeccioso en algún lugar del organismo. · El diagnóstico etiológico de la endocarditis infecciosa. · Monitoreo de la terapia antimicrobiana. · Evolución de la infección.

Tratamiento previo con antibióticos Limitaciones: Factores que hacen que se obtengan hemocultivos negativos en EI: Tratamiento previo con antibióticos Cultivos obtenidos al final de un proceso crónico (más de 3 meses) Endocarditis causada por microorganismos de difícil desarrollo. Endocarditis no infecciosa Endocarditis mural Endocarditis derecha Diagnóstico no correcto