Expresión de proteínas y mRNA Lic. María Mercedes Tiscornia Cátedra de Biología Molecular y Genética
Dogma central de la biología molecular
¿Qué realizamos en el práctico, de la clase pasada, donde trabajamos con proteínas?
SDS - PAGE
Western - Blot La detección de la proteína por medio de anticuerpos que reconocen la secuencia primaria, requiere la desnaturalización de la misma. Primeramente, se realiza una SDS – PAGE. Luego, se realiza una transferencia a un soporte de sólido (filtro de nitrocelulosa o nylon). La transferencia se realiza por la aplicación de un campo eléctrico o por capilaridad. Se expone la membrana a un anticuerpo específico de la proteína a reconocer que será detectado por otro anticuerpo marcado.
Anticuerpos-Antígenos Los anticuerpos son proteínas producidas en los vertebrados en respuestaa la exposición a estructuras extrañas conocidas como antígenos. Las sustancias extrañas en el organismo y que son reconocidas por los anticuerpos de forma específica se denomina antígeno.
EJEMPLO DE INTERPRETACIÓN Western blot for p27/Kip1 on AtT-20 cell lysates treated with DMSO (CT), 1 nmol/L octreotide plus DMSO (Oct), 1 nmol/L rapamycin, and 1 nmol/L octreotide plus 1 nmol/L rapamycin for 24 h (A); SHP-1dn– transfected (B) and Myr-Akt–transfected (C) AtT-20 cell lysates treated with DMSO (CT), 1 nmol/L octreotide plus DMSO (Oct), and 1 nmol/L rapamycin; and AtT-20 cell lysates treated as in B and C in the presence of the GSKβ inhibitor SB (14 μmol/L; D). Cerovac et al., 2010.
RT-PCR
Interpretación de RT-PCR
Real Time-PCR