DETERMINACION FLUORIMETRICADE QUININA EN TONICA Pablo Fernández López

¿QUE ES LA FLUORESCENCIA?

FLUORESCENCIA: Absorción molecular de un fotón Emisión una luminiscencia a mayor Salto de Stokes Toma su nombre de la fluorita

Extensión del sistema de electrones Rigidez estructural Impedimentos estéricos Efecto de átomo pesado interno Naturaleza de la transición Formación de complejos organometálicos Efectos de los sustituyentes FACTORES ESTRUCTURALES

Extensión del sistema de electrones Extensión del sistema de electrones

Rigidez estructural

Impedimentos estéricos cis 1,2-difenileteno trans 1,2-difenileteno

Efecto de átomo pesado interno FLUORESCENCIA RELATIVA 100% 7% 0.2% <0.05%

Absortividad molar alta Velocidad de fluorescencia elevada n Absortividad molar baja Velocidad de fluorescencia pequeña Naturaleza de la transición fluorescente

Formación de complejos organometálicos Cambio en la naturaleza de la transición n -Análisis de metales -Análisis de ligandos poco fluorescentes Favorecer el cruzamiento entre sistemas

Efectos de los sustityentes Los electrodonadores: -NH 2, -NHR, -NR 2, -OH, y -OR aumentan la eficacia de la fluorescencia,desplazándola a mayores Los electroaceptores: -COOH,-COOR, -CHO, -COR y –NO 2,reducen la eficacia de la fluorescencia al introducir una transición n- *. Los halógenos producen efecto de átomo pesado interno Los grupos sulfónicos no modifican significativamente la fluorescencia

FACTORES DEL MEDIO Temperatura Polaridad Viscosidad Atomo pesado externo pH Puentes de hidrógeno Otros solutos: atenuación de la fluorescencia

Calibrado de ácido nalidíxico

Fluorescencia de la orina

Fluorescencia del suero sanguíneo

Fluorescencia de la leche de vaca

Fluorescencia de la quinina excitación emisión Fluorescencia Longitud de onda (nm)

Fluorescencia de la quinina excitación emisión Fluorescencia Longitud de onda (nm)

Fluorescencia de la quinina excitación emisión Fluorescencia Longitud de onda (nm)

Fluorescencia de la quinina excitación emisión Fluorescencia Longitud de onda (nm)

Fluorescencia de la quinina excitación emisión Fluorescencia Longitud de onda (nm)

FUNCIONAMIENTO DE UN FLUORIMETRO

PROCEDIMIENTO 1.- Preparar disoluciones de 100, 200, 300, 400 y 500 ppb a partir de una disolución de sulfato de quinina de 2.5 ppm y enrasar a 25 ml con H 2 SO N. 2.- Registrar los espectros de excitación y emisión de una de las muestras y medir la intensidad de fluorescencia a 350 nm de excitación y 450 nm de emisión de todas ellas para construir la recta de calibrado. 3.- Pasar el contenido de un agua tónica a un vaso de precipitado y agitar vigorosamente a temperatura ambiente durante 10 minutos. 4.- Tomar 1.0 ml y añadir la cantidad necesaria de H 2 SO 4 concentrado (36 N) para que en un volumen final de 250 ml sea 0.1 N. 5.- Registrar los espectros de excitación y emisión, comprobando que en estas condiciones la fluorescencia del agua tónica es debida únicamente a la quinina. 6.- Medir la fluorescencia a 350 nm de excitación y 450 nm de emisión calculando la concentración de quinina en el agua tónica a partir de la recta de calibrado. MATERIALESPRODUCTOS - Espectrofluorímetro - Matraces de 25 ml. - Pipetas graduadas. - Vaso precipitado. - Agitador magnético con núcleo. - Agua tónica - H 2 SO 4 - Bisulfato de quinina PRÁCTICA Nº 1 DETERMINACIÓN ESPECTROFLUORIMÉTRICA DE QUININA EN AGUA TÓNICA