Introducción a la Célula Microscopía JA Cardé, PhD UPR-Aguadilla

Objetivos Repasar las partes que componen el microscopio y sus funciones. Conocer los diferentes microscopios utilizados para estudiar la célula. Establecer la importancia que posee el uso del microscopio en el estudio de la célula a distintos niveles. Practicar en el uso y manejor el correcto del microscopio.

El Microscopio

Terminología magnificación resolución apertura numérica índice de refracción inversión profundidad contraste parfocal

Resolución = 0.6 x largo de onda ____________________ Apertura Numérica (NA)

Apertura Numérica

Indice de refracción

01_06_What can we see.jpg Resolución: distancia mínima entre dos puntos a la que son distinguidos como dos puntos Cuál microscopio tendrá una mejor resolucion: uno con 200nm o uno con 0.2 nm?

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Tipos de Microscopios Tipo Uso / Imagen campo brillante : tejido, células, microorganismos vivos o fijos. Imagen: gris o negro con fondo blanco. Comunes, baja resolución campo oscuro : especímenes sin tinción. Imagen: fondo oscuro imagen brillante invertidos: morfología de cultivos vivos, Imagen: gris cultivo de tejido contraste de fase: especímenes vivos, no tinción, Imagen: grises;

-1000X r: 0.2um 3 factores -luz enfocada por condensador - buena preparación para que la luz pase - conjunto de lentes y buen enfoque

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Tipos de Microscopios Tipo Uso / Imagen fluorescencia: estructuras discretas, fluorocromos, UV confocal: organelos, citoesqueleto, macromoleculas, laser, imagen fluorescente, alta resolución TEM: estructuras internas celulares, imagen blanco/negro 2D, alta resolución SEM: estructuras externas, image, 3D, alta resolución

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01_27_cytoskeleton.jpg Citoesqueleto - Unico de eucariotas -Actina, tubulina - Dirigen y Guian los Movimientos celulares

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01_28_Microtubules.jpg - Abonan al concepto de un citop dinamico!!

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Organismos Modelos

Ocular Cuerpo tubular Brazo Revolver Pinzas Objetivos Carro mecanico Laminilla Platina Macro Condensador/Diafragma Lampara Micro Nivel Base

Visualización Célula Microscopios Laminillas Cubreobjetos Cubeta o bandeja de tinción Agujas Pinzas Escalpelo Pinzas Acetocarmín y Azul de metileno Goteros Cebolla Palillos de dientes Agua

Protocolo Separar una de las hojas internas de la cebolla y desprender la tenue membrana que está adherida por su cara inferior cóncava. Depositar el fragmento de membrana en una laminilla con unas gotas de agua. Pon el porta sobre bandeja de tinción para que caiga en ella el agua y los colorantes. Escurrir el agua, añadir una gotas de Acetocarmín sobre la membrana y dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente. ¡No debe secarse la epidermis por falta de colorante o por evaporación del mismo!

Protocolo… Con el cuentagotas bañar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante. Colocar sobre la preparación un cubreobjetos evitando que se formen burbujas y llevarla al microscopio. Observa la preparación a distintos aumentos, empezando por el más bajo. (10x y 40x) Identifica las distintas células del tejido epidérmico y las de las hojas del bulbo de cebolla si estuviera disponible

Cebolla nativa (150x) Cebolla azul metilen (150x).

Núcleo (600x) Retículo Endoplásmico (600x)

Células Epiteliales Bucales Raspa suavemente el interior de la mejilla con un palillo (siempre por la parte roma, procurando no cortarse). Coloca la mucosa blanca que se obtiene en el portaobjetos, añade una gota de agua. Realiza una extensión (frotis) deslizando el borde de un porta sobre el que tiene la muestra.

Protocolo… Coloca el porta en la placa de Petri, añade unas gotas de colorante sobre la muestra y déjalo actuar durante cinco minutos. Lava con cuidado el exceso de colorante y sécalo con un poco de papel de filtro. Añade una gota de agua a la muestra. Coloca el cubreobjeto apoyándolo por un lado y dejándolo caer para que no queden burbujas. Observa la preparación al microscopio, utilizando varios objetivos, realiza un dibujo detallado de las células e indica el aumento del mismo.

Células epitelio bucal con azul de metileno

Resultados y Discusión 1.Prepara en tu libreta dibujos de las células sin tinción y con tinción en distintos aumentos. 2.Rotula e identifica las partes de la célula en los dibujos. 3.Busca en internet las estructuras principales de la célula con su nombre y función. 4.Compara y contrasta células animales con vegetales. 5.A que se podría deber que el núcleo adquiera mas intensidad de color? 6.Que mas se observo ademas de células de mucosa bucal?