CULTIVO CELULAR Proliferación de Linfocitos con Concanavalina A Inmunología Aplicada Dra. Ana Esther Aguilar Cárdenas
Obtención de células esplénicas. Ratón Perfundir con 5 mL de RPMIss Suspensión celular en tubo de 15 mL Centrifugar 1500 rpm, 10’ Decantar sobrenadante Resuspender en 5 mL RPMIss Centrifugar 1500 rpm, 10’ Decantar sobrenadante Resuspender en 5 mL RPMIs Extracción del bazo
Conteo de Linfocitos Dilución 1:20 10 L suspensión + 90 L azul tripano Llenar cámara de New Bauer Realizar conteo de linfocitos (40x) Ajustar suspensión con RPMIs (10 6 cel/mL)
Muestreo en Placas Llenar 3 pozos con: 500 L de la suspensión de linfocitos ajustada L de Concanavalina A 10 g/mL Llenar 1 pozo con: 500 L de la suspensión de linfocitos ajustada L de RPMI suplementado. Incubar la placa a 37°C durante 24 horas. Realizar las observaciones