Promotor: o T7: pET Requiere la ARN polimerasa del bacteriófago T7 que es MUY activa y específica para su promotor. Generalmente se utilizan en cepas que expresan T7 ARN polimerasa bajo el control del represor lac. Expresión en E. coli
BL21 (DE3) pLysS: o Defectiva en las proteasas lon y OmpT (membrana externa) o Sensible a rifampicina (se puede inhibir la ARNpol endógena) o Lisógeno λDE3: contiene secuencia de la ARNpol del bacteriófago T7 (bajo control promotor lac) o Si tiene el plásmido pLys expresa la lisozima de T7 en niveles bajos: se une a T7 ARNpol e impide la transcripción (ayuda a la ruptura celular: específica para el peptidoglicano de la membrana externa)
Promotor: o λp L : otros pET Promotor p L del bacteriófago λ, fuerte. Represor termo sensible cIts857 (cepas que lo expresan): reprime a baja temperatura (30°C) pero no a altas (42°C). Productos tóxicos para la bacteria huésped. Expresión en E. coli
Terminador de la transcripción: o T7, t0 (fago λ), T1 del operón rrnB Intrínsecos (Rho-independientes): secuencia rica en GC que forma una horquilla, seguida de un tramo- U. Desestabilizan el complejo de la ARNpol y lo disocian. Expresión en E. coli
Eficiencia de la traducción: o Inciación: Sitio de unión de ribosomas corriente arriba del ATG. Secuencia de Shine-Dalgarno. 5-9 nucleótidos; 5-7 nucleótidos del AUG; interactúa con el extremo 3’ del ARN 16S. o Uso de codones: Cambiar los codones raros (especialmente en el extremo 5’, o aminoterminal de la proteína) o usar cepas especiales. Expresión en E. coli