Métodos para Susceptibilidad a fármacos anti- tuberculosos de segunda línea Elsa María Zapata F. Corporación para Investigaciones Biológicas Unidad de Bacteriología y Micobacterias 22 Marzo 2013

Validados segunda línea Métodos Pruebas Fenotípicas Pruebas Genotípicas Validados segunda línea Proporciones Múltiples LJ, MB 7H10, MB 7H11. GenoType MTBDRplus y MTBDRsI ® Proporciones Múltiples MB 7H11. Bactec MGIT 960 ® GeneXpert MTB/RIF® TLA (Microcolonias en Agar-Capa Delgada Nitrato Reductasa (NRA) Secuenciación Genes de Resistencia Colorimétrico tipo MTT- AB GenoType MTBDRsI ® TLA (Microcolonias en Agar-Capa Delgada) MODS

M. tuberculosis puede ser: De acuerdo a la resistencia a los medicamentos antituberculosos M. tuberculosis puede ser: MDR XDR Resistente Isoniazida - Rifampicina 1ª Línea MDR + Resistencia: Quinolona: Ofloxacina,Ciprofloxacina,Moxifloxacina Inyectables: Kanamicina, Amikacina o Capreomicina 2ª Línea

Susceptibilidad de Mycobacterium tuberculosis a medicamentos de primera y segunda línea: Validación del sistema automatizado BACTEC MGIT 960 Mejía GI1,2., Zapata EM1.,Guzman A1., Alvarez N 1,2, Robledo J.1,2 1 Corporación para Investigaciones Biológicas, CIB 2 Escuela de Ciencias de la Salud, Universidad Pontificia Bolivariana

Objetivo Comparar la técnica de BACTEC -MGIT960 para determinar la susceptibilidad a medicamentos de primera y segunda línea en M. tuberculosis fármaco resistentes (MDR) con el método estándar de las proporciones múltiples (MPM) y poder ofrecerla como una alternativa más rápida en la obtención de resultados de susceptibilidad a medicamentos antituberculosos. Aislamientos con resistencia extendida (XDR)

Métodos Aislamientos: 105 M. tuberculosis 62 MDR-TB 13 aislamientos con alguna resistencia 30 aislamientos sensibles

Método Proporciones Multiples El método de referencia para pruebas de susceptibilidad para M. tuberculosis es el Método de las Proporciones (MP), proporciona datos entre 4 y 6 semanas, luego de tener el aislamiento. La emergencia de aislamientos MDR y XDR, necesita nuevos métodos que proporcionen datos precisos y rápidos, para el inicio de un tratamiento efectivo.

Sistema Bactec MGIT 960 ®

Estandarización 1ª Línea Resultados Estandarización 1ª Línea MEDICAMENTO MP MGIT %C Total MDR 62 60 97 Mono-resistencia 12 100 Sensibles 30 31

para los antibióticos de primera línea Nivel de concordancia entre el MPM y el sistema automatizado BACTEC MGIT 960® para los antibióticos de primera línea Medicamento evaluado No. Aislamientos resistentes por MPM n=105 No. Aislamientos resistentes por BACTEC MGIT 960® n=105 Kappa IC 95% Estreptomicina 57 58 0.98 0.94 - 1 Isoniazida 71 1 Rifampicina 65 62 0.94 0.87 - 1 Etambutol 31 27 0.90 0.81 - 0.99

Nivel de concordancia entre el MPM y el sistema automatizado BACTEC MGIT 960® para los antibióticos de segunda línea en aislamientos M. tuberculosis MDR Medicamento evaluado No. Aislamientos resistentes por MPM n=85 No. Aislamientos resistentes por BACTEC MGIT 960® Kappa IC 95% Ofloxacina 10 12 0.98 0.94 - 1 Moxifloxacina 9 1 Amikacina 14 16 0.87 - 1 Capreomicina 0.90 0.81 - 0.99

Conclusiones La concordancia entre el sistema MGIT 960 y el método estándar de las proporciones para medicamentos de 1ª línea es alta, como previamente se ha reportado La concordancia entre el sistema MGIT 960 y el método de las proporciones para medicamentos de 2ª línea, es alta para aminoglicosidos y fluoroquinolonas, no tan alta para cicloserina, etionamida y PAS, es necesario trabajar en las concentraciones y la estabilidad de medicamentos. BACTEC MGIT 960 es preciso y rápido para pruebas de susceptibilidad para Mycobacterium tuberculosis, proporcionando resultados en un tiempo menor: 10 días vs 28 días

Control Calidad Externo EEDD

M. tuberculosis Fármaco resistente (MDR) ESTUDIO PILOTO: LUZ VERDE OMS- SSSA-LDSP- HLM- CIB M. tuberculosis Fármaco resistente (MDR)

ESTUDIO PILOTO: LUZ VERDE OMS- SSSA-LDSP- HLM-CIB Ingresado al estudio: 62 pacientes MDR Realiza seguimiento por 2 años con controles mensuales 8%(4) persisten cultivos Positivos 92% (58) Negativos MTB-XDR Total: 5 Resistencia: Levofloxacina, Kanamicina, Capreomicina, ETH y Moxifloxacina

Resultado de Pruebas de Susceptibilidad a Medicamentos de Segunda Línea n=67 ANTIBIÓTICO SENSIBLE RESISTENTE LEVOFLOXACINA 61(91%) 6(9%) MOXIFLOXACINA 62(92%) 5(8%) KANAMICINA 57(85%) 10(15%) CAPREOMICINA CICLOSERINA 67(100%) 0(0%) PAS 54(81%) 13(19%) ETIONAMIDA 24(36%) 43(64%) PZA(ENZIMA- MGIT) 32(41%) 35(59%)

Mecanismos de Resistencia a Etionamida

La tuberculosis es curable, su tratamiento es gratuito, sin embargo, cada minuto mueren cuatro personas en el mundo a causa de la enfermedad.