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Laboratorio en la Coinfección (Pruebas rápidas VIH) Santiago Estrada, M.D. Director General Laboratorio Clínico Congregación Mariana www.labcongregacion.org.co.

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1 Laboratorio en la Coinfección (Pruebas rápidas VIH) Santiago Estrada, M.D. Director General Laboratorio Clínico Congregación Mariana XII Simposio VIH/SIDA coinfección TB

2 Clases de pruebas para el diagnóstico de VIH ELISAs 1° generación: lisados purificados de VIH. Sensiblidad y especificidad disminuidas. 2° generación: proteinas reconvinantes o péptidos sintéticos para VIH 1 y 2 3° generación: elisa emparedado con Ag como conjugado. Alta sensiblidad y redujeron el periodo de ventana considerablemente. 4°generación: detectan Ag y Ac.

3 Pruebas rápidas Caracteristicas Rápida: se obtiene el resultado en menos de 30 minutos. Simple: se realiza en 3-4 pasos, requiere mínimo entrenamiento y equipo. De fácil interpretación: formato de tarjeta o tirilla con reacción visual. Conservación: menos de 30°C, no requieren refrigeración Bajo costo TDR/SDI/DE/03.1 Laboratory-based evaluation of rapid syphilis diagnostic 2003

4 Clases de pruebas para el diagnóstico de VIH Pruebas rápidas Aglutinación Inmunofiltración Inmunocromatografia Dipstick Lectura por mancha de color, linea o aglutinación de partículas La mayoría se realizan en 20 minutos por lo que se conocen como pruebas simples/rápidas World Health Organization.HIV Assays: Operational Characteristics Report 14 / Simple/Rapid tests. 2004

5 Terminología Prueba diagnóstica: se realiza la prueba de VIH en personas teniendo en cuenta sus manifestaciones clinicas (signos y síntomas). Prueba de tamizaje: se realizan la prueba de VIH en todas las personas de una población definida. Prueba blanco: se realiza la prueba de VIH en subpoblaciones de personas de alto riesgo, basado este en sus conductas de riesgo o características demográficas. Opt-out tamizaje: realizar una prueba de VIH previa notificación al paciente que la prueba se hará; el consentimiento se asume a menos que el paciente lo rechace.

6 Impacto de las pruebas rápidas en la Salud Pública Alta tasa de personas que no reclaman sus resultados. En el 2000 en USA, 31% de las personas no reclamaban sus resultados. Necesidad de un resultado inmediato para definir una conducta. Salas de parto. Manejo de la exposición con y sin riesgo biológico. Realizar tamizajes en poblaciones de alto riesgo.

7 Conocimiento del estadio serológico de personas con VIH en USA Número de personas infectadas con VIH 1.2 millones Número de personas que desconocen su infección 252, ,000 (24%-27%) Estimativo anual de nuevas infecciones 50,000

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9 Cuatro prioridades: 1. Ofrecer de rutina la prueba de VIH en todos los sitios de atención médica. 2. Implementar nuevos modelos de diagnóstico de infección de VIH en lugares diferentes a los sitios médicos de atención. 3. Prevenir nuevas infecciones, trabajando con personas infectadas con VIH y sus compañeros. 4. Disminuir la transmisión perinatal. Avances en la Prevención del VIH (AHP): nuevas estrategias para cambiar la epidemia MMWR April 18, 2003

10 Fuentes de pruebas para VIH y resultados positivos Pruebas VIH+**Pruebas de VIH* 17%44%Consultorios privados 27%22%Hospital, ED, consulta externa 2% 6% 5% 9% 21% 0.7%Clinicas de drogadictos 0.1%Clínicas de ITS 0.6%Cárceles 5%Centros de consejeria para VIH 9%Centros públicos *National Health Interview Survey, 2005 **Suppl. to HIV/AIDS surveillance, % - 44% de adultos de años fueron tamizados millones de personas entre años son tamizados anualmente en USA

11 Cuatro pruebas rápidas para VIH, aprobadas por la FDA Sensiblidad (95% C.I.) Especificidad (95% C.I.) OraQuick Advance - Sangre total - fluido oral - plasma 99.6 ( ) 99.3 ( ) 99.6 ( ) 100 ( ) 99.8 (99.6 – 99.9) 99.9 (99.6 – 99.9) Uni-Gold Recombigen - sangre total - suero/plasma 100 (99.5 – 100) 99.7 (99.0 – 100) 99.8 (99.3 – 100)

12 Sensibilidad (95% C.I.) Especificidad (95% C.I.) Reveal G2 - suero - plasma 99.8 (99.2 – 100) 99.8 (99.0 – 100) 99.1 (98.8 – 99.4) 98.6 (98.4 – 98.8) Multispot - suero/plasma - HIV (99.9 – 100) 100 (99.7 – 100) 99.9 (99.8 – 100) Cuatro pruebas rápidas para VIH, aprobadas por la FDA

13 OraQuick Advance VIH-1/2 CLIA-aprobada para sangre del dedo, sangre total, fluido oral; moderada complejidad en plasma Almacenada a temperatura ambiente. Tamiza para VIH-1 and 2. Resultados en 20 minutos.

14 Muestra de sangre por punción de dedo…

15 Introducir el asa dentro del vial y sumergir

16 Recolectar la muestra de fluido oral, pasando el dispositivo entre la encia y el labio. Guantes opcionales; los desechos no son biopeligrosos

17 Insertar el dispositivo; esperar resultado en 20 minutos

18 Positive Negative Control positivo Positivo HIV-1/2 Lectura del resultado en 20 – 40 minutos

19 Uni-Gold Recombigen CLIA-Aprobada para sangre por punción del dedo, sangre total; moderada complejidad con suero, plasma Almacenar a temperatura ambiente. Tamiza para VIH-1. Resultados en 10 minutos.

20 Agregar 1 gota de muestra al pozo

21 Agregar 4 gotas de solución de lavado

22 Leer resultados en minutos Positive Negative

23 Reveal G2 CLIA moderada complejidad con suero, plasma Reconstituir y refrigerar los reactivos. Tamizaje para VIH-1. Realizar la prueba en 5 minutos.

24 Centrifugar para obtener suero o plasma

25 Agregar buffer para reconstituir el conjugado. (Suficiente para 15 pruebas; refrigerar para almacenar)

26 Agregar 3 gotas de buffer para humedecer la membrana

27 Agregar una gota de suero o plasma, seguidos de 3 gotas de buffer.

28 Agregar 4 gotas del agente revelador

29 Agregar 3 gotas del buffer de lavado

30 Leer resultados inmediatamente Reactivo Negativo

31 Multispot VIH-1/VIH-2 CLIA moderada complejidad con suero, plasma Refrigerar los reactivos. Diferencia VIH-1 de VIH-2. Prueba en 15 minutos.

32 Dilución de plasma o suero

33 Remover y descartar el tapón

34 Varios tiempos de reactivos & lavados

35 NegativoHIV-1 & HIV-2 Positivo Peptido VIH-2 Recombinante VIH-1 Peptido VIH-1 Control positivo

36 Ventajas y desventajas de las pruebas rápidas para VIH Buenas noticias: más personas positivas recibirán su resultado. Malas noticias: algunas personas recibirán un resultado falso positivo antes de la prueba confirmatoria.

37 Interpretación de las pruebas rápidas Para pruebas de laboratorio: Sensibilidad: Probabilidad prueba=positiva si paciente=positivo Epecificidad: Probabilidad prueba =negativa si patiente=negativo Valor predictivo: Probabilidad paciente=positivo si prueba =positiva Probabilidad paciente =negativo si prueba =negativa

38 Ejemplo:Prueba 1,000 personas VIH prevalencia = 10% Verdaderos positivos: Falsos positivos: Valor predictivo positivo:100/104 = 96% 1004 Especificidad = 99.6% (4/1000)

39 Ejemplo:Pruebas 1,000 personas Especificidad = 99.6% (4/1000) VIH prevalencia = 10% Verdaderos positivos: 100Falsos positivos: 4 Valor predictivo positivo: 100/104 = 96% VIH prevalencia = 0.4% Verdaderos positivos:4Falsos positivos:4 Valor predictivo positivo:4/8 = 50%

40 Valor Predictivo de una única prueba depende de la especificidad & Varia con la prevalencia Especificidad Prevalencia de VIH Valor predictivo, Prueba positiva 10% 99% 98% 92% 5% 98% 96% 85% 2% 95% 91% 69% 1% 91% 83% 53% 0.5% 83% 71%36% 0.3% 75%60% 25% 0.1% 50% 33% 10% OraQuik único EIA Reveal 99.9%99.8%99.1% 97% 95% 87% 77% 63% 50% 25% Uni-Gold 99.7%

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42 Pruebas de tamizaje rutinarias para VIH, en paciente de urgencias Pruebas de OraQuick desde octubre de % aceptó la prueba de VIH. 98% recibió el resultado. 2.5% nuevos diagnósticos de VIH. 80% ingresó al programa de VIH 4 nuevos proyectos (Wisconsin, Massachusetts, Los Angeles, New York) Cook County Hospital, Chicago

43 Tamizaje para VIH en urgencias Cook County ED, Chicago2.5% Grady ED, Atlanta2.7% Johns Hopkins ED, Baltimore3.2% Massachusetts (4 hospitals)2.0% Porcentaje de sitios de urgencias donde se realizó la prueba de VIH : 1.2% Nuevos VIH+

44 Tamizaje para VIH con OraQuik en MIRAID: Mother Infant Rapid Intervention At Delivery Resultado de la prueba de VIH en mujeres en trabajo de parto: 12 hospitales en 5 ciudades mujeres tamizadas 54 (0,7%) nuevas infecciones. 6 falsos positivos, no falsos negativos. 15 falsos positivos por EIAs. Especificidad de OraQuik 99,92%; EIA 99,80% VPP: OraQuik 90%; EIA 76% Bulterys et al, JAMA July 2004

45 Resultados en los tiempos para pruebas rápidas, Punto de atención (Point-of-Care) vs misma prueba realizada en el laboratorio Prueba en el Punto de atención (Point-of-care): promedio 45 min – (rango 30 min – 2.5 horas) Misma prueba en el laboratorio: promedio 3.5 horas – (rango 94 min – 16 horas) MMWR 52:36, Sept 16, 2003

46 Estudio del CDCs para la prueba de OraQuick 527,775 pruebas compradas en el período – 137 dependencias de salud en 36 estados Período: septiembre 2003 – septiembre 2004: – Personas probadas 173,003 – Positivas para VIH 2,741 (1.6%) – Insumos utilizados para el entrenamiento 17,266 – 25,926 reactivos usados para el uso de controles externos.

47 Changes in HIV Testing at Same Sites After Rapid Testing Introduced

48 Changes in Positive Tests at Same Sites After Rapid Testing Introduced

49 Fuentes de consulta General and technical information (updated frequently): CDC: OMS: operational characteristic of hiv

50 El secreto para aburrir a la gente consiste en decirlo todo. Voltaire


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