CULTIVO DE VIRUS EN LABORATORIO

Presentación del tema: "CULTIVO DE VIRUS EN LABORATORIO"— Transcripción de la presentación:

1 CULTIVO DE VIRUS EN LABORATORIO
H. Rivera.

2 EL VIRUS Los virus son microorganismos estrictamente intracelulares.
Ha perdido la información genética para codificar la maquinaria necesaria para la generación de energía metabólica o síntesis de proteínas Por tanto, dependen absolutamente de células vivas para replicarse Afectan: bacterias, invertebrados, vertebrados y plantas

3 SISTEMAS PARA EL CULTIVO DE VIRUS
Cultivos celulares: monocapas celulares Primarios Líneas celulares Líneas celulares contínuas o estables Huevos embrionados aviares: Diferentes edades y vías de inoculación Animales de laboratorio: Ratones, hamsters, monos, etc. Animales hospedadores naturales: Primates no humanos, bovinos, porcinos, ovinos, etc.

4 CULTIVOS CELULARES Importancia: Investigación científica
Aislamiento e identificación de virus Diagnóstico de enfermedades virales. Preparación de reactivos: Anticuerpos monoclonales Preparación de vacunas de uso veterinario y humano Determinación de toxinas bacterianas

5 CULTIVO CELULAR PRIMARIO
Células preparadas a partir de tejidos u órganos fetales Disgregación mecánica o enzimática Selección: células que sobreviven disgregación, adhieren a matriz y capaces de dividirse y formar monocapa Método de explante: Apropiado para tejidos blandos o pequeños

6 LÍNEAS CELULARES Líneas celulares o cultivos secundarios: despúes del primer subcultivo o “pasaje” Puede ser subcultivada hasta 10 a 12 veces Luego mueren (apoptosis)

7 LÍNEA CELULAR CONTÍNUA O ESTABLE
Son de origen tumoral (Ejem: transfección con oncogenes Son originados por virus tumorales Por tratamiento con sustancias carcinogénicas Algunas líneas celulares: VERO: Riñon de mono verde africano ST: células de testículos de cerdo RK 13: células de riñón de conejo PK-15: células de riñón de cerdo

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10 Células vero: muestra del AATCC (American Type Culture Collection)

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12 DIFERENCIAS ENTRE CULTIVO DE CELULAS SECUNDARIAS Y LINEAS ESTABLES
Cultivos celulares secundarios: Cariotipo diploide Son mortales Tienen fenómeno de inhibición por contacto Requieren superficie para iniciar división celular Requieren de factores de crecimiento: suero fetal Líneas celulares continuas o estables: Cariotipo poliploide Son inmortales No tienen fenómeno de inhibición por contacto No requieren superficie para iniciar división celular No requieren suero fetal o en concentraciones bajas

13 MATERIALES DE PLÁSTICO, MEDIOS

14 FLUJO LAMINAR, MICROSCOPIO INVERTIDO

15 Materiales y equipos utilizados para la elaboración de cultivos celulares

16 CAMBIOS OBSERVADOS EN LAS MONOCAPAS
Monocapa normal Monocapas infectadas: Lisis Corpúsculos de inclusión Presencia de antígeno

17 CULTIVO DE VIRUS EN HUEVOS EMBRIONADOS
Uso de huevos embrionados: Permite cultivo viral en forma sencilla, barata y no requiere de equipos sofisticados. Susceptibilidad de sus tejidos a numerosos virus aviares Se debe emplear huevos libres de agentes patógenos: SPF La inoculación se realiza por diversas rutas que esta en función a la edad del embrión

18 VÍAS DE INOCULACIÓN DE VIRUS EN HUEVOS EMBRIONADOS
Saco vitelino: embriones de 5-6 días Cavidad alantoidea: embriones 8-9 días Membrana corioalantoidea: embriones días Saco amniotico: embriones días Endovenosa: embriones días

19 Vías de inoculacion más comunes

20 Observación de lesiones en huevos embrionados inoculados con el virus de la viruela aviar, Herpes

21 CULTIVO DE VIRUS EN ANIMALES DE LABORATORIO
Para cultivar virus en animales de laboratorio debe tenerse en cuenta: Tropismo: Rutas de inoculación: Respuesta del animal a la inoculación: Confirmación con pruebas adicionales: Presencia de cuerpos de inclusión Presencia de antígeno viral