Rocio Inga Peña Dpto. Bioquímica, Biol Mol & Farmacología ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS.

Presentación del tema: "Rocio Inga Peña Dpto. Bioquímica, Biol Mol & Farmacología ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS."— Transcripción de la presentación:

1 Rocio Inga Peña Dpto. Bioquímica, Biol Mol & Farmacología ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS

2

3

4

5

6

7

8 Gel de apilamiento (menor concentración) Gel de separación (la concentración depende de la resolución que se busque )

9

10 DETERMINACION DEL TAMAÑO DE UNA PROTEINA PROBLEMA RF = distancia recorrida por la banda distancia total al frente de la corrida (RF)

11 Inicio de corrida (donde inicia el gel separador) Frente de corrida (línea donde termina el colorante)

12 ELECTROFORESIS BIDIMENSIONAL Separación por: Punto isoeléctrico Tamaño

13 Separación por Punto Isoeléctrico

14

15

16

17 Punto isoelectrico diferente pero del mismo tamaño Punto isoelectrico igual pero diferente tamaño

18 Análisis de Proteínas Multiméricas - Determinación de número y tamaño de subunidades

19 Dithiothreitol (DTT) y β -mercaptoetanol ( β ME) son agentes denaturantes

20 ELECTROFORESIS DE PROTEINAS EN UNA DIMENSION CONDICIONES: DENATURANTES NO-DENATURANTES PRACTICA A REALIZAR

21 Las muestras para analizar serán diferentes fracciones obtenidas durante la purificación de la Pirazinamidasa: Extracto inicial Fracción sin proteìna, sin actividad Fracción con proteìna, sin actividad Fracción con proteìna, con actividad

22 Actividad enzimáticaCantidad de Proteína (Pirazinamidasa) (Bradford)