SUSCEPTIBILIDAD A INFECCIONES POR

Presentación del tema: "SUSCEPTIBILIDAD A INFECCIONES POR"— Transcripción de la presentación:

1 SUSCEPTIBILIDAD A INFECCIONES POR
MICOBACTERIAS Vía IFN-/IL-12 Bioq. M. Mercedes Gallinger Bioq. Javier Jimenez Residencia de Inmunología para Bioquímicos Hospital de Pediatría “J. P. Garrahan” COREBIO 2006

2 FENOTIPOS INMUNOLÓGICOS
MEDIO AMBIENTE Factores de exposición Factores micobacterianos FENOTIPOS INMUNOLÓGICOS FENOTIPOS CLÍNICOS EXPOSICIÓN A MICOBACTERIA INFECCIÓN Inmunidad innata INFECCIÓN Inmunidad adaptativa Factores genéticos Factores genéticos Factores no genéticos HUÉSPED

3 fundamentales en la defensa contra microorganismos intracelulares.
IFN e IL12 fundamentales en la defensa contra microorganismos intracelulares. IFN Producido por células NK, Li Th1, Li T CD8 + y Li T. Activa fagocitos mononucleares y Neutrófilos. Favorece la diferenciación Li T CD4+ a Li Th1 inhibiendo la diferenciación a Li Th2.

4 IL-12 Producida por subpoblaciones de macrófagos y células dendríticas activadas. Estimula cél. NK. Favorece la diferenciación Li T CD4+ a Li Th1 y estimula su proliferación. Puede ser inducida por exposición de MN a microorganismos o sus productos como LPS.

5 IL-12 IFN- MECANISMO DE DEFENSA CONTRA MICOBACTERIAS: Vía IFN-/IL-12
DC-sign IL-12 R Toll/CD14 IFN- R de manosa 1 IL-12R 2 fagosoma muerte bacteriana IFN- TNF- R1 TNF- quemoquinas IFN-R R2 TNF-R Li Th1/cél. NK FAGOCITO MN

6 IL-12R IL-12p70 IL-12R1 p40 p35 IL-12R2 Li Th1/cél. NK activadas
Tyk2 p40 p35 IL-12R2 Jak2 Li Th1/cél. NK activadas

7 Li Th1/cél. NK activadas P P P P Núcleo STAT-4 STAT-4 STAT-4-P

8 IFN-R IFN-R1 Jak1 IFN-R2 Jak2 IFN- Fagocito MN

9 IFN-R1 IFN-R2 Ubicua, en todas las células nucleadas.
Pobremente inducible. Cadena que une IFN-. IFN-R2 Bajo nivel de expresión. Inducible, finamente regulada  limitante para la respuesta a IFN-. No une IFN-. Cadena transductora de señales. Estabiliza el complejo IFN- /IFN-R1.

10 Fagocito MN P P STAT-1 P STAT-1-P P STAT-1-P P STAT-1-P Núcleo

11 SUSCEPTIBILIDAD MENDELIANA A INFECCIONES POR MICOBACTERIAS
1996: defectos hereditarios en la inmunidad mediada por IFN/L12  susceptibles a infecciones por micobacterias ambientales no tuberculosas o el bacilo de la vacuna BCG. IL-12R1 IL-12p40 IFN-R1 IFN-R2 STAT-1 Incapacidad de sus células de producir o responder a IFN-.

12 SUSCEPTIBILIDAD MENDELIANA A INFECCIONES POR MICOBACTERIAS
1996: defectos hereditarios en la inmunidad mediada por IFN/L12  susceptibles a infecciones por micobacterias ambientales no tuberculosas o el bacilo de la vacuna BCG. IL-12R1 IL-12p40 IFN-R1 IFN-R2 STAT-1

13 MECANISMO DE DEFENSA CONTRA MICOBACTERIAS: Vía IFN-/IL-12
DC-sign IL-12 R Toll/CD14 IFN-  R de manosa 1 IL-12R 2 fagosoma TNF- muerte bacteriana IFN- quemoquinas R1 IFN-R R2 TNF-R Li Th1/cél. NK FAGOCITO MN

14 Deficiencia de IL-12R1 Herencia: AR.
Patógenos más frecuentes: BCG, Salmonella spp. Deficiencia: - completa (58)  fenotipo clínico más severo - parcial (1)

15 Receptores mutantes EC TM IC WT IL-12R1 AR + - completo AR + +/-
parcial AR - completo EC TM IC Herencia Expresión en superficie Unión a IL12 Defectos en señalización

16 SUSCEPTIBILIDAD MENDELIANA A INFECCIONES POR MICOBACTERIAS
1996: defectos hereditarios en la inmunidad mediada por IFN/L12  susceptibles a infecciones por micobacterias ambientales no tuberculosas o el bacilo de la vacuna BCG. IL-12R1 IL-12p40 IFN-R1 IFN-R2 STAT-1

17 MECANISMO DE DEFENSA CONTRA MICOBACTERIAS: Vía IFN-/IL-12
DC-sign  IL-12 R Toll/CD14 IFN- R de manosa 1 IL-12R 2 fagosoma TNF- muerte bacteriana IFN- quemoquinas R1 IFN-R R2 TNF-R Li Th1/cél. NK FAGOCITO MN

18 Deficiencia de IL-12p40 Herencia: AR
Ausencia de producción de IL12p70. Infecciones: la mayoría por M bovis BCG y en menor frecuencia Salmonella spp. Evolución clínica: variable, de infección local y curable (n=10) a severa y fatal (n=6). Mayor tasa de muerte (6 de 16) que deficiencia de IL-12R1 (6 de 59).

19 SUSCEPTIBILIDAD MENDELIANA A INFECCIONES POR MICOBACTERIAS
1996: defectos hereditarios en la inmunidad mediada por IFN/L12  susceptibles a infecciones por micobacterias ambientales no tuberculosas o el bacilo de la vacuna BCG. IL-12R1 IL-12p40 IFN-R1 IFN-R2 STAT-1

20 MECANISMO DE DEFENSA CONTRA MICOBACTERIAS: Vía IFN-/IL-12
DC-sign IL-12 R Toll/CD14 IFN- R de manosa 1 IL-12R 2 fagosoma TNF- muerte bacteriana  IFN- TNF- quemoquinas R1 IFN-R R2 TNF-R Li Th1/cél. NK FAGOCITO MN

21 Deficiencia de IFN-R1/2
Herencia: AR y AD, dependiendo del defecto. Patógenos más frecuentes: BCG, micobacterias ambientales. Deficiencia: - completa  fenotipo clínico más severo (comienzo más temprano, mayor número y severidad de infecciones, menor sobrevida).  infecciones resistentes a quimioterapia antimicobacteriana intensa. - parcial  DP-IFNR1: mayor frecuencia de osteomielitis por micobacterias con buena respuesta al tratamiento.

22 Receptores mutantes EC TM IC WT IFN-R1 AR - completo AR + - completo
+/-? parcial AD +++ + parcial Herencia Expresión en superficie Unión a IFN Defectos en señalización

23 Receptores mutantes EC TM IC WT IFN-R2 AR - +? completo AR + parcial
Herencia Expresión en superficie Unión a IFN Defectos en señalización

24 SUSCEPTIBILIDAD MENDELIANA A INFECCIONES POR MICOBACTERIAS
1996: defectos hereditarios en la inmunidad mediada por IFN/L12  susceptibles a infecciones por micobacterias ambientales no tuberculosas o el bacilo de la vacuna BCG. IFN-R1 IFN-R2 IL-12R1 IL-12p40 STAT-1

25 MECANISMO DE DEFENSA CONTRA MICOBACTERIAS: Vía IFN-/IL-12
DC-sign IL-12 R Toll/CD14 IFN- R de manosa 1 IL-12R 2 fagosoma TNF- muerte bacteriana  IFN- TNF- quemoquinas R1 IFN-R R2 TNF-R Li Th1/cél. NK FAGOCITO MN

26 Deficiencia de STAT-1 Deficiencia: - completa (2)  AR
 BCGitis diseminada tratada exitosamente con drogas anti-micobacterianas. Muerieron por infección viral severa. - parcial (3)  AD

27 N° (%) muertes < 11 años
Pacientes reportados N° (%) muertes < 11 años Principales infecciones (n°) Gen Defecto Herencia M bovis BCG (12) M tuberculosis (1) Salmonella spp (5) IL12B (p40) Completo AR 16 5 (31%) M bovis BCG (27) MNT (12) M tuberculosis (3) Salmonella spp (29) Completo AR 58 6 (10%) IL12RB1 (IL12R1) Parcial AR 1 - M bovis BCG (1) MNT(22) M bovis BCG (11) M tuberculosis (1) Salmonella (1) Completo AR 26 7 (27%) IFNGR1 (IFNR1) M bovis BCG (1) Salmonella (1) M tuberculosis (1) AR 2 - Parcial MNT (30) M bovis BCG (14) M tuberculosis (1) Salmonella (3) AD 46 - Completo AR 3 - MNT (3) M bovis BCG (1) IFNGR2 (IFNR2) Parcial AR 1 - M bovis BCG (1) Completo AR 2 2 (100%) inf. viral M bovis BCG (2) Viral (2) STAT1 Parcial AD 3 - M bovis BCG (1) MNT (1)

28 Tratamiento Deficiencia de IL12R1 o IL12p40: quimioterapia ATB intensa a largo plazo, IFNr dependiendo el caso. Deficiencia parcial de IFNR: quimioterapia ATB intensa a largo plazo, IFNr a mayores dosis. Deficiencia completa de IFNR: usualmente refractarias a ATB, TMO. Deficiencia de STAT-1 parcial: quimioterapia ATB. Deficiencia de STAT-1 completa: quimioterapia ATB.

29 persistente por 13 años. Actualmente sin enfermedad
Edad / Sexo 4 años/ fem 3 años/ fem 15 años/masc Presentación Enf. Regional 1 mes 3 meses 6 meses Infección diseminada 8 meses 17 meses 2 años Aislamiento Biopsia axilar, hemocultivo, coprocultivo Lav. gástrico Ganglio distal Biopsia axilar, Lav. gástrico Ganglio regional Ganglio distal Secr. bronquial Tratamiento Anti TBC IFNr Evolución Sin enfermedad Infección persistente persistente por 13 años. Actualmente sin enfermedad

30 Evaluación de la expresión y funcionalidad de moléculas de la vía IFN/IL12 por citometría de flujo.
Expresión de IFNR1 en monocitos. Fosforilación de STAT1 mediada por IFN r en monocitos. Producción de IL12 (p40/p70) citoplasmática en monocitos activados con LPS e IFN . Expresión de la cadena 1 del receptor de IL12 en CMT activadas con PHA. Fosforilación de STAT4 mediada por IL12r en CMT previamente estimuladas con PHA e IL2.

31 Fosforilación de STAT1 mediada por IFN r en monocitos
Paciente Control Normal 1x106 CMT BASAL ESTIMULADO RPMI 20%SBF IFN r (20UI) 10 min, 37°C Lavar Marcación i.c. con mAbs anti-STAT1 Y STAT1-P Análisis por CF en región monocítica

32 Evaluación de la función del Receptor de IFN
Fosforilación de STAT1 89% M1 Stat1 P Stat1 P basal est R1

33 Producción de IL12 (p40/p70) citoplasmática

34 Expresión de la Cadena 1 Rc. IL12
83% 55% 51% N 81% 0% P3 3% P2 80% P1 %CD25 % Cadena 1 Rc. IL12 PHA PHA+IL2 Paciente paciente normal 0% 0% 51% 51% M1 M1 Cadena 1 Rc IL12 Cadena 1 Rc IL12

35 Fosforilación de STAT4 mediada por IL12r en CMT previamente estimuladas con PHA e IL2.
Paciente Control Normal 1x106 CMT PHA IL-2r PBS 2%SBF IFNr IL-12r 20 min, 37°C Lavar Marcación i.c. con mAbs anti-STAT4 Y STAT4-P Análisis por CF en región linfoide

36 Evaluación de la funcionalidad del receptor de IL12
fosforilación de STAT 4 paciente normal M1 98% STAT 4 70% M1 M1 STAT 4-P con IL12 neg 34% M1 80% STAT 4-P con IFN 77% M1 M1

37 Paciente 2 RNT PAEG Vacunado al nacer con BCG.
6 meses: BGCitis localizada/regional en brazo derecho. Durante los 2 primeros años: infección pulmonar recurrente. 2 años: aislamiento de M bovis-BCG de esputo y ganglio axilar. Durante los siguientes 13 años: múltiples tratamientos anti-micobacterianos. Sin eliminación de la micobacteria ni mejoría clínica. 9 años: HIV (-), IDP(-). 14 años: Se constató deficiencia de IL-12R1 por BM: Q542X, CF: función y expresión de IL-12R1: ausente. 15 años: deterioro clínico importante a pesar de tto. Anti-micobacteriano e IFNr (40 g/m2)

38 Medición de actividad bactericida/bacteriostática del suero: ausente.
Se constata enteropatía perdedora de proteínas y esteatorrea. Aumento de dosis de IFNr (100 g/m2) y cambio de anti-micobacterianos. + 2 meses de tto.: negativiza el esputo. + 8 meses de tto.: neuropatía óptica y periférica (Estreptomicina, Linezolid). Tto. concluído al año. Profilaxis con acitromicina semanal. + 6 meses de profilaxis: continúa con cultivos (-), lesión torácica resuelta, neuropatía óptica y periférica: recuperación significativa.

39 4 meses Inicio de tratamiento 6 meses 9 meses

40 GRACIAS POR SU ATENCIÓN!!!