Revisión de las metodologías actuales para aislar e identificar Campylobacter spp.  de los alimentos Cynthia Fontes Candia.

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1 Revisión de las metodologías actuales para aislar e identificar Campylobacter spp.  de los alimentos
Cynthia Fontes Candia

2 Introducción. La campilobacteriosis es una enfermedad transmitida por los alimentos. Es la tercer enfermedad trasmitida por alimentos. Esta relacionado con el síndrome típico diarreico y el síndrome de Guillain- Barre. Aunque existen mas de 20 Campylobacter spp., las mas comunes son Campylobacter jejuni y Campilobacter coli. La leche cruda se identifica como el principal vehiculo de transición de campilobacteriosis

3 Aislamiento de Campylobacter de alimentos.
Las cepas de Campilobacter spp. Aislado de seres humanos crecieron en condiciones aeróbicas a 42°C y fueron serológicamente diferentes de las cepas de origen animal. Las cepas de Campilobacter spp. Aisladas de animales no presentaron crecimiento a 42°C, lo que sugiere que estas cepas fueron de Campylobacter fetus.

4 Condiciones de enriquecimiento para el aislamiento.
Se presenta un problema ya que en la etapa de crecimiento es común que otras bacterias crezcan . Se probaron distintos medios líquidos para el aislamiento de Campylobacter de carne de pollo. El protocolo de enriquecimiento para el aislamiento de Campylobacter spp. de carne de pollo se baso en una proporción de 25g de carne con 225ml de un medio enriquecido. (1:9 tiene resultados similares.

5 Entorno microaeróbico.
Bolsitas Selladas Contienen componentes utilizados para generar oxigeno Frascos Sistema de evacuación y remplazo. Se introduce una mezcla microaerobica.

6 Sustancias bloqueadoras de oxigeno.
En los medios de cultivo para aislar Campylobacter se utilizan agentes como, sales de hierro, norepinefrina, piruvato de sodio etc. Estas sustancias neutralizan el efecto toxico de los radicales de oxigeno y ayuda a crear un ambiente microbiótico. Oxyrase ®. Es un sistema enzimático que elimina selectivamente oxigeno de su ambiente circulante.

7 Se realizo un estudio donde:
Condiciones aeróbicas Suplementaron con 33mg de cefoperazona y 4mg de anfotericina B Se incubaron a 42°C por 48hr Se realizo un estudio donde: Bolton con Oxirase Bolton + Suplementos 131 muestras de carne de pollo. 25g de carne con 100ml de Bolton + Oxidase 25g de carne con 100ml de Bolton + Suplemento Suplemento: 5% (v / v) de sangre de caballo lisada

8 La tasa de aislamiento de Bolton Y Bolton con Oxyrase no fueron significativamente diferentes.
Se afirma que medio liquido enriquecido de forma natural produce ambientes microareóbicos adecuados para el crecimiento de Campylobacter spp.

9 Medios de placa para Campylobacter
El mas utilizado es el CCDA (desoxicolato c)efoperazona carbón) ya que ofrece una fácil identificación de Campylobacter spp. En general no hay diferencia en la tasa de aislamiento entre el CCDA y los medios en base de sangre. Al igual que en los medios líquidos se agregan inhibidoras para evitar el crecimiento de flora bacteriana entérica.

10 Filtros de membrana. Son utilizados para aislar Campilobacter spp.
Se coloca en la parte superior de la placa y se quita durante la incubación. Es recomendable incluir cefoperazona y anfotericina B Al utilizar filtros de membrana en elegido el medio en placa como el mas eficaz en el aislamiento de Campylobacter spp.

11 Identificación de Campilobacter spp.
Pruebas de aglutinación en látex. Utiliza anticuerpos poiclonales para detectar o flajelar membranas de proteinas. Son muy utilizados pero solo para la identificar C. jejuni, C. coli y C, lari.

12 Ensayos inmunoenzimáticos.
Una reciente evaluación de estos ensayos mostró que la EIA. Los ensayos son muy variables y que por sí solos estos ensayos no deben ser utilizado para la identificación directa de Campylobacter spp. En muestras de heces. Los ensayos EIA no son suficientes para la identificación

13 Métodos de identificación molecular
Son rápidas y específicas para la identificación de Campylobacter spp. Detectan segmentos específicos de ADN, que son únicos para la identificación de la especie y en ocasiones la sub especie. Se utiliza el método de PCR para la identificación.

14 Conclusiones. Campylobacter es un patógeno transmitido por alimentos significativo asociado con el consumo de aves de corral cocida o leche cruda. En productos de aves, las unica Campylobacter spp. son C. jejuni y C. coli. En muestras con un bajo número de células, el enriquecimiento durante 48 horas bajo condición aeróbica es recomiendado para alcanzar un número detectable de Campylobacter células. Bolton y caldo de agua de peptona tamponada incluso se pueden utilizar como caldos de enriquecimiento y CCDA es la mejor opción en los medios de placa. La incubación de las muestras a 42 ° C durante todo el proceso de aislamiento es todavía preferido. La confirmación de supuestos Campylobacter aislados sugerido por el FSIS del USDA se basa en la microscopía de contraste de fase y la prueba de aglutinación en latex. Aunque no es aceptada por los organismos reguladores de los alimentos en los EE.UU., los ensayos de ADN son métodos sencillos y rápidos para confirmar Campylobacter aislados e identificarlos a nivel de especie en el mismo tiempo.